[發(fā)明專利]一種小麥酯酶生物傳感器的制備方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200910072241.6 | 申請(qǐng)日： | 2009-06-11 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101576527A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-11-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王振宇;焦巖 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 王振宇 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N27/327 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 150001黑龍江省哈爾濱*** | 國(guó)省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 小麥 生物 傳感器 制備 方法 | ||
1、一種小麥酯酶生物傳感器的制備方法，其特征在于小麥酯酶生物傳感器的制備方法的步驟如下：一、小麥酯酶的提?。?、小麥經(jīng)粉碎過(guò)40目篩后，準(zhǔn)確稱量各10.00g，置于100mL錐形瓶中，分別加入蒸餾水，一定濃度的鹽溶液各30mL，搖床中震蕩提取，之后在4000r/min的速度離心20min，上清液過(guò)濾后測(cè)酶活，選擇出最佳提取溶劑。二、純化：1、脫鹽將硫酸銨分級(jí)鹽析后，Tris-Hcl(0.07mol/l，pH＝8)溶解的酶液裝入透析袋中，對(duì)蒸餾水透析48h，并用BaCl2溶液檢測(cè)透析袋外溶液，直至透析袋外溶液與BaCl2溶液無(wú)沉淀生成。2、使用SephadexG-100凝膠層析柱(2.5cm×60cm)，洗脫液為緩沖液，以一定的流速每管5ml進(jìn)行收集，測(cè)定每管酶液比活力，檢測(cè)時(shí)做三個(gè)平行樣。三、小麥酯酶固定化：將去離子水與一定量的硅酸酯類(lèi)化合物按照一定比例混合(R值)，加入25μLHCl，120mL甘油溶液(75％)和400mL聚乙烯醇(PVA)溶液(5％)，超聲30min。之后吸取80μL溶膠，加入150μL一定濃度的TritonX-100和162μL一定濃度的PEG-400溶液，漩渦振蕩20min即得到溶膠。將小麥酯酶以30mL/g的比例溶解于一定pH值的緩沖溶液中，磁力攪拌一定時(shí)間。吸取酶液加入到雜化溶膠中，旋渦振蕩10min。吸取100μL的混合溶膠均勻涂布于載玻片上，于4℃干燥36h，即得到固定化后的小麥酯酶。使用前，將其在pH?6.5的磷酸鹽緩沖溶液中浸泡10min，再用O型圈將該酶膜固定在球型精密型酸度計(jì)玻璃電極表面，即制成小麥酯酶生物傳感器。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥酯酶生物傳感器的制備方法，其特征在于步驟一中，小麥酯酶的提取，采用0.15mol/LNaCl溶液，搖床中震蕩提取溫度為30～50℃。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥酯酶生物傳感器的制備方法，其特征在于步驟二中使用SephadexG-100凝膠層析柱純化，洗脫液為0.1～0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，流速0.1～0.5mL/min。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥酯酶生物傳感器的制備方法，其特征在于步驟三中所采用的硅酸鹽為T(mén)EOS，TritonX-100濃度為5％～10％，固定化酶反應(yīng)緩沖液為pH為6.0～7.0磷酸鹽緩沖液，磁力攪拌20～50min。
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