[發明專利]膨脹蛭石法常溫保存昆蟲病原線蟲

無效

• 申請號: 200910069461.3
• 申請日: 2009-06-26
• 公開（公告）號: CN101978824A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 阮維斌;丁桂濤;魏純純;李洪浩;井超;高玉葆
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;A01N63/02;A01P7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用膨脹蛭石對昆蟲病原線蟲進行長期保存的方法。?

背景技術

目前，國內的食用韭菜食品中毒的事件時有發生，給人們的身體健康帶來了很大的危害，有的還引發了一些國際糾紛，造成了巨大的經濟損失。韭菜中毒事件的根源便是傳統防治蟲害方法的不科學性，即大量應用化學農藥，這非常容易導致環境污染、農產品農藥殘留超標、昆蟲抗藥性增強(如韭菜害蟲韭蛆抗藥性增加，常規低毒農藥已經難以對其控制)，嚴重破壞生態且威脅食品安全、城市綠化和中藥的種植。?

我國食品安全引起國內外的關注使得開發綠色農藥已成為趨勢。昆蟲病原線蟲作為新型生物殺蟲劑，被廣泛地用于防治農、林、牧草、花卉和衛生等重要害蟲。它對害蟲具主動搜尋能力，特別是對土棲性及鉆蛀性害蟲；同時，其使用方便，對人、畜、環境安全。在工業化國家的生物農藥市場中，昆蟲病原線蟲的銷售額第二，屬我國當前優先發展的高技術產業重點領域。昆蟲病原線蟲制劑已占國際生物農藥市場銷售額的13％，僅次于蘇云金桿菌產品的市場份額。世界上殺蟲劑的年銷售額約為140億美元，并每年以2-3增長；其中15億美元用于防治農林地下害蟲，對于這類防治對象，實際上沒有其它生物農藥與線蟲競爭。而且，作為新型生物農藥，昆蟲病原線蟲的產品在美國不需要登記，可以直接生產銷售。?

昆蟲病原線蟲可以在無公害蔬菜生產、城市綠化中森林病蟲害的防治和草坪建植維護、藥用植物生產等方面應用。國內從上世紀80年代已經開始進行昆蟲病原線蟲共生菌的培養，但是相關研究范圍窄、進展緩慢。目前，僅廣東昆蟲所已有相關科研成果并初步投放市場，但每年的生產量僅能滿足數十萬畝害蟲的防治。線蟲的大規模商業化生產很少，并且沒有一種很有效的線蟲活性和毒性的保存方法，導致商品線蟲的貨架期比較短，大大影響了昆蟲病原線蟲的推廣應用。?

發明內容

本發明的目的是提供一種用膨脹蛭石保存昆蟲病原線蟲的方法，本發明是對膨脹蛭石進行干燥滅菌并結合定量水分后得到昆蟲病原線蟲的保存介質，在一定溫度下對昆蟲病原線蟲很好的保存效果，能夠很好地維持昆蟲病原線蟲的活性和毒性。本發明可以吸收昆蟲病原?線蟲表面的水分，使其快速進入休眠狀態，膨脹蛭石吸水膨脹后的空隙為昆蟲病原線蟲的休眠提供了有利環境，有效地延長了昆蟲病原線蟲的保存時間，并且膨脹蛭石的化學、物理性能穩定，操作過程簡便易行。使用本發明可以使昆蟲病原線蟲的活性和毒性有效地維持110天，并在昆蟲病原線蟲使用的過程中提供一種侵染的介質，有效提高昆蟲病原線蟲的侵染率。本發明生產成本低，效果顯著，容易推廣。?

本發明包括所選擇的礦物質膨脹蛭石的種類；所述的與膨脹蛭石混合的線蟲標準生理線蟲標準生理溶液的pH、所含的銅離子的濃度；所述的蛭石與線蟲標準生理溶液兩者混合的質量比以及混合后混合物的pH；所述的加入了昆蟲病原線蟲的膨脹蛭石要求的保存溫度。?

所述的礦物質是在天津市中北鎮燕西礦產公司購買的銀白色粒狀吸水膨脹蛭石。?

所述的線蟲標準生理溶液的pH為2，所含銅離子濃度為1×10^-3mol/L。?

所述的蛭石與線蟲標準生理溶液混合的質量比為1∶2，混合后混合物的pH為6.3。?

所述的加入了昆蟲病原線蟲的膨脹蛭石要求的保存溫度為25℃。?

本發明膨脹蛭石法保存昆蟲病原線蟲條件的探索具體包括以下步驟：?

A.線蟲保存材料的選擇：?

本發明采用物質吸附脫水使線蟲休眠的方法保存線蟲，并在三種不同的粘土礦物質進行了篩選。線蟲保存材料全部購買于天津市中北鎮，篩選的原則是選擇吸水能力較強并且對線蟲活性和毒性保持最有利的一組。?

將三種蛭石分別編號A、B、C，A種蛭石為紅褐色粉狀粘土物質，粒徑在3mm以下；B種蛭石為銀白色塊狀礦物質，粒徑在1cm左右；C種蛭石為純白色圓粒狀礦物質，粒徑在6mm左右。?

粗測各種蛭石的單位質量的吸水值：將三種蛭石進行充分干燥，然后稱取一定量的蛭石，放于培養皿中，然后向培養皿中滴加蒸餾水至蛭石完全濕潤為止(見表1)。?

根據不同種類蛭石的吸水能力的不同，將其分別與不同濃度的線蟲溶液混合：?

A：5g蛭石+15mL無菌水+1000條線蟲?

B：50g蛭石+75mL無菌水+2000條線蟲?

C：50g蛭石+50mL無菌水+2000條線蟲?