[發明專利]雨生紅球藻孢子破壁率的測定方法

有效

• 申請號: 200910063306.0
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN101609039A
• 公開（公告）日: 2009-12-23
• 發明（設計）人: 李夜光;耿亞紅;溫小斌
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

1.一種雨生紅球藻孢子破壁率的測定方法，其步驟是：

A、二氯甲烷-正己烷提取、測定蝦青素含量，二氯甲烷-正己烷提取蝦青素在室內進行，取雨生紅球藻孢子粉，記為W₁_mg，放入10mL離心管中，加入5ml二氯甲烷-正己烷提取液，蓋緊離心管蓋，搖動離心管，使藻粉在提取液中分散均勻，在室溫20-25℃下提取，提取過程間隔2-3分鐘搖動離心管，使藻粉與提取液混勻，促進蝦青素的提取；5000轉/分鐘離心，收集上清液；向離心管中加入5ml二氯甲烷-正己烷提取液，按上述方法重復提取一次，2次提取液合并到25ml容量瓶中，用二甲基亞砜定容，混勻后取1mL，放入10mL容量瓶中，二甲基亞砜定容后，用分光光度計，1cm光徑比色杯，以二甲基亞砜為空白溶液，測量530nm波長光吸收值A₁，根據光吸收系數計算樣品蝦青素百分含量C₁：

C₁＝100％×(A₁×10×250)/1556?W₁；

B.二甲基亞砜提取、測定蝦青素含量：取雨生紅球藻孢子粉，記為W₂?mg，放入10ml離心管中，加入5ml二甲基亞砜，蓋緊離心管蓋，搖動離心管，使藻粉在提取液中分散均勻，70℃恒溫水浴中提取，提取過程間隔2-3分鐘搖動離心管，使材料與溶劑混勻，促進蝦青素的提取；5000轉/分鐘離心，收集上清液；向離心管中加入5ml二甲基亞砜，按上述方法重復提取一次，2次提取液合并到25ml容量瓶中，用二甲基亞砜定容，混勻后取1ml，放入10ml容量瓶中，二甲基亞砜定容后，用分光光度計，1cm光徑比色杯，以二甲基亞砜為空白溶液，測量530nm光吸收值A₂，根據二甲基亞砜溶解的蝦青素溶液的光吸收系數計算樣品蝦青素含量C₂：

C₂＝100％×(A₂×10×250)/1556?W₂；

C.計算孢子破壁率：二氯甲烷-正己烷提取、測定的樣品蝦青素含量與二甲基亞砜提取、測定的樣品蝦青素含量的比值反映樣品中破壁孢子與孢子總數的比例，即孢子破壁率，用公式計算孢子破壁率R：R＝C1/C2×100％；

所述的二氯甲烷-正己烷體積比是3∶1提取蝦青素。