[發明專利]一種鑒別羅氏沼蝦前無節幼體期胚胎發育質量的方法

無效

• 申請號: 200910047657.2
• 申請日: 2009-03-16
• 公開（公告）號: CN101839855A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發明（設計）人: 黃曉榮;章龍珍;莊平;江琪;姚志峰;劉鑒毅;張濤;馮廣朋;趙峰;閆文罡
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院東海水產研究所
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;C12Q1/50;C12Q1/32;C12Q1/25
• 代理公司: 上海東方易知識產權事務所 31121
• 代理人: 歐陽俊立

技術領域

本發明屬于水產養殖技術領域，尤其涉及到一種鑒別羅氏沼蝦胚胎發育質量的方法。

背景技術

在生產實踐中，水生生物胚胎發育質量的好壞直接影響養殖生產效益的高低，因此，客觀準確評價水生生物胚胎發育質量的好壞具有非常重要的理論意義與應用價值。在評價水生生物胚胎發育質量的好壞時，目前主要有以下幾種方法：一、利用顯微鏡直接觀察在不同發育時期水生生物胚胎的發育情況，這種方法需要不間斷地取樣進行拍照觀察；二、通過體外培養的方法，統計最后的孵化率、出膜率和成活率等，這種方法受外界環境因子較多，且隨著不同魚類的早期發育時間的長短試驗周期會有較大變化。

發明內容

本發明需要解決的問題是提供一種準確判別羅氏沼蝦前無節幼體期胚胎發育質量的方法。

本發明配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是在羅氏沼蝦的繁殖季節，收集一定數量的抱卵蝦，分批采集前無節幼體期的胚胎，這個時期胚胎的發育特征如下：胚區似橋細胞群相繼形成三對附肢原基，包括兩對觸角原基和一對大顎原基，位于各附肢原基的內側形成神經節原基；用這個時期的胚胎制備組織勻漿，用試劑盒分別測定不同批次胚胎中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，如果胚胎中總ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.404±0.015U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性高于2.067±0.139U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性高于352.225±23.214U/gprot，為胚胎質量較好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之間，肌酸激酶的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之間，乳酸脫氫酶的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之間，為胚胎發育質量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.010±0.002U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性低于0.552±0.138U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性低于5.890±0.658U/gprot，則為胚胎發育質量差。

本發明通過測試胚胎發育中幾種重要酶活性的高低，結合本方法提供的區分胚胎發育質量的鑒別數據來判別胚胎發育質量的好壞，與常用方法相比，減少了通過人為觀察判斷的主觀因素，并可同時檢測不同批次數量大的樣本，檢測時間短，具有鑒別準確和客觀的顯著效果，鑒別準確率可達到98％以上。利用本方法鑒別出的胚胎，質量好的胚胎出膜率可達到90％以上，質量一般的胚胎出膜率只有60％左右，質量差的胚胎基本不能正常孵化出膜。本發明所用儀器設備簡單，只需一臺普通的分光光度計，成本低廉。

具體實施方式

在羅氏沼蝦的繁殖季節，購買一定數量的抱卵蝦，每批次取5尾前無節幼體期的胚胎，超聲波離心后制備成10％的組織勻漿，用試劑盒(南京建成生物工程研究所出品的試劑盒)在分光光度計下分別測定不同批次前無節幼體期胚胎中總ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脫氫酶(SDH)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性，每個樣重復三次，結果取平均值，運用統計軟件對結果進行分析處理。如果胚胎中總ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，CK的活性高于0.404±0.015U/mgprot，SDH的活性高于2.067±0.139U/mgprot，LDH的活性高于352.225±23.214U/gprot，判斷為胚胎質量較好；如果胚胎中總ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之間，CK的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之間，SDH的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之間，LDH的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之間，則判斷為胚胎發育質量一般；如果胚胎中總ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，CK的活性低于0.010±0.002U/mgprot，SDH的活性低于0.552±0.138U/mgprot，LDH的活性低于5.890±0.658U/gprot，則判斷為胚胎發育質量差。

運用這種方法鑒別羅氏沼蝦前無節幼體期胚胎質量較為準確和客觀，鑒別準確率可達到98％以上。