[發明專利]抗心磷脂抗體檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 200910047379.0
• 申請日: 2009-03-11
• 公開（公告）號: CN101498715A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 崔貽芬
• 申請（專利權）人: 上海堯浩生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及一種抗心磷脂抗體檢測試劑盒及其應用。

背景技術

抗心磷脂抗體(ACL)屬于是一種以血小板和內皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗 原的自身抗體。常見于系統性紅斑狼瘡(SLE)及其他自身免疫性疾病。該抗體與血栓形成、 血小板、自然流產或宮內死胎關系密切。研究證實，許多因素與ACA產生密切相關，常見的 原因有：

(1)自身免疫性疾病：如系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)的硬皮病等；

(2)病毒感染：如腺病毒、風疹病毒、水痘病毒、腮腺炎病毒等感染；

(3)其它疾病：如支原體系統疾病等；

(4)口服某些藥物：如氯丙嗪、吩噻嗪等；

心磷脂是pangborn?1941年從牛的心肌中分離出來的一種具有抗原性的磷脂，并加以命 名，其在哺乳動物肌中含量最高，每個心磷脂分子包含4個不飽和的脂肪酸，極易氧化。ACA 是與心磷脂分子中帶負電荷的磷酸二酯基團結合，但這種結合必須要有心磷脂分子中的甘油 酯部分，如果以芐環取代引甘油酯部分，心磷脂的抗原性則消失。ACA分子中的脂肪酸部分 為其抗原性的必需成分；ACA與其它分子中帶負荷的磷酸二酯基團并不結合，而只與磷脂分 子中的該成分起反應。近年Hotkko等研究發現，ACA僅與已氧化的心磷脂結合，而并不能 與進行氧化的還原性的心磷脂類似物結合。

自1983年Harris等建立了測ACA(抗心磷脂抗體)的方法以來，有關該抗體的研究在世界 范圍內得到廣泛重視并迅速發展。Koike認為心磷脂與ACA的IgG結合需ACA的輔因子β2 糖蛋白I(β2-GPI)的存在。Harris建立的ACA固相放射免疫法(RLA)所檢出的ACA現 認為是針對心磷脂與β2-GPI的復合體該法具有較高的敏感性，以后經Loizou等改良成與放 射免疫法效果相同而更為方便的ELISA法。目前現有檢測抗心磷脂抗體的方法有金標和化學 發光檢測抗體，只能作簡單的定性，而化學發光法需用專門的專用儀器，而對于血清中游離 抗體的檢測現大多用酶聯免疫吸附法(ELISA)，這種方法的特異性和敏感性均較高且無須特 殊儀器，既可定性又可定量，可檢測抗體類及亞類，易于標準化，具有操作簡單、結果正確、 省時等優點，現已被醫院普遍所采用，成為定量測定ACA的世界性標準。

心磷脂抗體ELISA檢測試劑盒定量檢測ACA結果的可靠性直接與其質量相關，如何保 證ELISA抗心磷脂抗體檢測試劑盒中試劑的特異性和靈敏度，提高試劑的穩定性，排除非特 異性干擾因子的干擾成為進一步提高ELISA抗心磷脂抗體檢測試劑盒質量的主要研究方向。

發明內容

本發明的目的是提供一種心磷脂抗體檢測試劑盒及其制備方法與使用，本發明提供的試 劑盒特異性與靈敏度高，試劑穩定性好，可定性與定量檢測ACA，為臨床診斷提供強有力的 可靠檢測依據。

本發明的抗心磷脂抗體檢測試劑盒包括：

(1)、用ACA抗原包被的預包被酶聯板；

(2)、用酶標抗體稀釋液稀釋的IgG酶標抗體溶液；

(3)、洗滌液；

(4)、樣品稀釋液；

(5)、陰性對照；

(6)、陽性對照；

(7)、顯色液；

(8)、終止液。

本發明的試劑盒采用間接法來檢測心磷脂抗體，將特異性抗原與固相載體聯結，形成固 相抗原；加受檢標本，標本中的抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物；在待測抗 體與特異性抗原結合后，將酶標抗體進一步與之反應，此時固相載體上帶有的酶量與標本中 受檢抗體的量相關；固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗體的量。

試劑盒中的ACA抗原為由牛心中提取的心磷脂抗原，純度需達到質量百分比98％以上。

試劑盒中的IgG酶標抗體為辣根過氧化物酶(HRP)標記的IgG抗體，IgG抗體可以是 各種類型的IgG抗體，如鼠抗人IgG、羊抗人IgG或兔抗人IgG。

酶標抗體原液用酶標抗體稀釋液稀釋的重量比例為1∶4000-1∶5000。