[發明專利]一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法

無效

• 申請號: 200910047148.X
• 申請日: 2009-03-06
• 公開（公告）號: CN101824395A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 鮑杰;楚德強;張建;畢德璽;朱培;蘆晨陽;范超
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/22
• 分類號: C12N1/22;C12P7/10;C12P1/00;C12R1/01;C12R1/645;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

1.一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，其具體步驟為：

(1)發酵菌種的活化：

從菌種保藏平板、保藏斜面或冷凍甘油保藏管保存的菌種接種于合成培養基，培養溫度25～45℃；轉速50～500rpm；培養12～36小時，OD₆₀₀值達到4～16；

在合成培養基中，葡萄糖濃度10～100g/L，營養鹽濃度是KH₂PO₄或K₂HPO₄?0.5～10g/l，MgSO₄·7H₂O?0.1～5g/l，(NH₄)₂SO₄?0.5～10g/l，酵母萃取粉或玉米漿0.1～10g/l；

所述的菌種為釀酒酵母、管囊酵母、樹干畢赤酵母或者運動發酵單胞菌菌株；

OD₆₀₀值是指含有菌體的溶液在600nm波長處的吸光值；

(2)培養基中添加固體秸稈進行同步糖化馴化培養種子：

活化的種子液的體積百分數為5～20％接種于固體秸稈的混合培養基中，在混合培養基中固體秸稈的質量百分數為3～30％，加入纖維素酶和營養鹽，轉速50～500rpm，溫度25～45℃，培養12～36小時，得到發酵菌種的漿液；

混合培養基是指以0.1～50g/L葡萄糖溶液調整固體秸稈固含量的培養基，其pH為2.0～8.0；

所述的纖維素酶的加酶量為1～30FPU/g?DM，FPU指纖維素酶液中的纖維素酶濾紙酶活，DM是指秸稈類物質干重；其中，纖維素酶液為商品化纖維素酶液；調整pH的溶液選自硫酸、氫氧化鈣溶液、氫氧化鈉溶液或者氨水中的一種或者兩種以上混合溶液；

所述的營養鹽為KH₂PO₄或K₂HPO₄?0.5～10g/L，MgSO₄·7H₂O?0.1～?5g/L，(NH₄)₂SO₄?0.5～10g/l，酵母萃取粉或玉米漿0.1～10g/L；

所述的固體秸稈選自固體秸稈原料或者固體秸稈處理物；

(3)種子液的多級擴大培養過程：

將步驟(2)獲得的種子液接種于含固體秸稈的培養基，在培養基中固體秸稈的質量百分數為3～30％，加入纖維素酶和營養鹽，在搖瓶或種子罐中擴大培養種子，培養轉速100～500rpm，溫度25～45℃，培養12～36小時，獲得種子培養液；種子液多級培養過程中培養級數涵蓋1級到6級，各培養級間接種量的體積百分比為5～20％，接種于發酵罐的種子液包括從1級到6級培養種子獲得的任一級的培養液，得到含發酵菌種的漿液。

2.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，在所述的步驟(1)中，菌種接種于合成培養基，培養溫度為30℃，轉速為150rpm。

3.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，在所述的步驟(1)中，所述的菌種為釀酒酵母。

4.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法其特征在于，在所述的步驟(2)中，轉速為150rpm，溫度為37℃，培養為18小時。

5.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，混合培養基的pH為5.0。

6.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的固體秸稈原料選自玉米秸稈、麥秸、稻草中的一種。

7.如權利要求6所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，?其特征在于，所述的固體秸稈原料選自玉米秸稈。

8.如權利要求1所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的固體秸稈處理物選自采用稀酸、蒸汽爆破、氨氣爆破、生物法預處理后的玉米秸稈、麥秸、稻草中的一種。

9.如權利要求8所述的一種以固體秸稈為碳源培養發酵種子液的方法，其特征在于，所述的固體秸稈處理物選自蒸汽汽爆預處理的玉米秸稈。?