[發(fā)明專利]OATP1B1重要基因突變檢測基因芯片

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910042820.6
• 申請日: 2009-03-09
• 公開（公告）號: CN101717816A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張偉;周宏灝;冀瑋;周淦
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/06
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因分析檢測領(lǐng)域，具體地說是涉及一種基因檢測芯片，更具體地 說是用于檢測與高血壓、惡性腫瘤、2型糖尿病、高膽固醇血癥治療藥物的反應(yīng)性 密切相關(guān)的有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1(簡稱OATP1B1)常見重要基因突變的基因檢測 芯片。

背景技術(shù)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國高血壓和糖尿病的患病人數(shù)分別約1.3億和2000萬，成人血脂異 常發(fā)生率約為18.6％，惡性腫瘤患者約180～200萬，在目前和將來很長一段時間內(nèi)， 藥物仍將是以上重大疾病治療的主要手段。肝臟是人體代謝和解毒藥物及外源性物 質(zhì)的主要器官，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1(OATP1B1)是一種肝臟特異性分布的轉(zhuǎn)運(yùn) 體。除靶向轉(zhuǎn)運(yùn)非結(jié)合型膽紅素、甲狀腺激素等內(nèi)源性物質(zhì)外，OATP1B1介導(dǎo)多種 具有重要臨床意義藥物的肝臟跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，如抗惡性腫瘤藥(伊立替康、甲氨喋呤)、 調(diào)血脂藥(普伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、西伐他汀)、抗高血壓 藥(纈沙坦、奧美沙坦、波生坦)、抗高血糖藥(瑞格列奈、那格列奈)等，與它們 的吸收、分布及毒物排泄等過程密切相關(guān)，進(jìn)而關(guān)乎藥物的療效和毒副作用。

藥物反應(yīng)的個體差異是臨床上極其普遍的現(xiàn)象，產(chǎn)生這種差異的原因有許多， 包括性別、年齡、體重、疾病狀況在內(nèi)的多種因素都可以導(dǎo)致不同病人對同一種藥 物的反應(yīng)出現(xiàn)量與質(zhì)的差別，然而20多年來的遺傳藥理學(xué)研究結(jié)果表明其中最重 要、最根本的因素是遺傳因素，即藥物代謝酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體和受體(藥物作用靶點(diǎn))的 基因多態(tài)性導(dǎo)致了其編碼蛋白的功能改變，進(jìn)一步使血藥濃度和藥物敏感性顯著不 同，一言以蔽之，遺傳變異導(dǎo)致了藥物反應(yīng)個體差異。

以他汀類降脂藥普伐他汀為例，該藥在肝細(xì)胞內(nèi)可有效抑制HMG-CoA還原酶并 抑制膽固醇的合成，同時外周循環(huán)中藥物濃度過高也可能造成最嚴(yán)重的致命性不良 反應(yīng)-橫紋肌溶解，研究發(fā)現(xiàn)某應(yīng)用該藥發(fā)生嚴(yán)重肌肉毒性的病人多為OATP1B1功 能嚴(yán)重缺陷的*15/*15基因突變者。通過提前鑒定攜帶有OATP1B1*15/*15基因突變 的攜帶者，及時換用其他藥物，可有效降低橫紋肌溶解的發(fā)生率，保障高風(fēng)險者的 生命安全。

經(jīng)過長期研究，目前國內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)OATP1B1的多個基因突變與相應(yīng)藥物的反應(yīng) 性(療效和毒副反應(yīng))密切相關(guān)，其中主要包括下列內(nèi)容(表1)：

表1?OATP1B1常見重要基因突變及其功能意義

以上所述的OATP1B1的基因突變與高血壓、惡性腫瘤、2型糖尿病、高膽固醇 血癥等疾病的治療藥物在人體內(nèi)的反應(yīng)性密切相關(guān)，這里所說的反應(yīng)性包括了藥物 的療效和安全性兩個方面，同種同劑量的藥物作用于擁有不同基因型的患者，有的 人恰好有效，有的人根本無效，還有的人會出現(xiàn)藥物的毒副反應(yīng)，因此利用各種基 因檢測技術(shù)在治療之前先確定病人的上述OATP1B1基因突變位點(diǎn)的基因型，根據(jù)檢 測的結(jié)果調(diào)整患者的用藥種類與劑量，可以使藥物發(fā)揮最佳的療效，最大限度地防 止毒副反應(yīng)發(fā)生，這就是基因?qū)蛐缘膫€體化用藥新模式。目前該種用藥模式已被 越來越多的科研人員、臨床醫(yī)生及患者所接受。

目前國內(nèi)外最常用的基因突變檢測方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多 態(tài)性分析(PCR-RFLP法)、序列特異性PCR、手工或自動測序等方法，這些方法不 僅操作繁瑣、檢測周期長、無法做到高通量，而且影響檢測結(jié)果的因素眾多，不易 控制，難以滿足臨床實(shí)際檢測的要求，目前只在科研領(lǐng)域進(jìn)行。

基因芯片(gene?chip)，又稱DNA芯片，是近些年在生物高科技領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)的 最具時代特征的重大科技進(jìn)展之一，它將能反映樣本中大量基因信息的基因探針(寡 核苷酸探針、cDNA克隆、PCR產(chǎn)物等)有序地固定在固相支持物(如醛基、氨基、 巰基、羧基等活性基團(tuán)修飾的載玻片或硅片、尼龍膜、硝酸纖維素膜)上形成陣列， 通過與實(shí)際樣本或擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交反應(yīng)和對熒光等雜交信號的檢測，只需一次試 驗(yàn)，就可高通量地獲得所有待檢基因的信息。與其他方法相比較，基因芯片的檢測 方法有多樣品并行處理能力、分析速度快、所需樣品量少、污染少、操作簡單、價 格低廉等優(yōu)點(diǎn)。因此利用基因芯片技術(shù)檢測上述OATP1B1的常見重要基因突變，是 當(dāng)下最好的選擇，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前尚未有對上述OATP1B1的常見重要基因突變進(jìn)行全面系統(tǒng)檢測的基因芯片 及其技術(shù)方案被披露。

發(fā)明內(nèi)容