[發明專利]一種殘殺威人工抗原及其合成方法

無效

• 申請號: 200910029608.6
• 申請日: 2009-03-28
• 公開（公告）號: CN101519367A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 羅世能;桑光明;林建國;王洪勇
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: C07C271/44
• 分類號: C07C271/44;C07K14/765;G01N33/566;G01N21/33
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1、一種殘殺威半抗原，其特征在于：以殘殺威2-(1-異丙氧基)苯基甲基氨基甲酸酯為原料，依次進行硝化反應，還原反應，制得殘殺威半抗原Hapten1，然后對Hapten?1?；频脷垰⑼肟乖璈apten?2；

所述殘殺威半抗原Hapten?1，化學名稱為2-異丙氧基-5-氨基苯基-N-甲基氨基甲酸酯；

及所述殘殺威半抗原Hapten?2，化學名稱為4-[4-異丙氧基-3-(N-甲基氨基甲酸酯基)苯胺基]-4-羰基丁酸。

2、一種殘殺威人工抗原，其特征在于：用權利要求1所述的殘殺威半抗原與牛血清白蛋白偶聯而得的產物；

殘殺威人工抗原1，其化學名稱為2-異丙氧基-5-氨基苯基-N-甲基氨基甲酸酯-牛血清白蛋白，簡稱為抗原Hapten1-BSA；

及殘殺威人工抗原2，其化學名稱為4-[4-異丙氧基-3-(N-甲基氨基甲酸酯基)苯胺基]-4-羰基丁酸-牛血清白蛋白，簡稱為抗原Hapten2-BSA。

3、權利要求1所述的殘殺威半抗原的制備方法，其特征在于制備殘殺威半抗原Hapten?1及殘殺威半抗原Hapten?2：

以殘殺威為原料，依次進行硝化反應，還原反應，制得殘殺威半抗原Hapten1，然后對Hapten?1?；频脷垰⑼肟乖璈apten?2；其合成路線如下：

a)、2-異丙氧基-5-硝基苯基-N-甲基氨基甲酸酯的合成：在100mL三頸燒瓶中，加入20.9g殘殺威，40mL的濃硫酸，30mL的濃硝酸，80℃下保溫反應3h，反應液倒入冰水中，抽濾，固體用乙醇重結晶，得到針狀結晶2-異丙氧基-5-硝基苯基-N-甲基氨基甲酸酯；

b)、2-異丙氧基-5-氨基苯基-N-甲基氨基甲酸酯Hapten?1的合成：稱取2-異丙氧基-5-硝基苯基-N-甲基氨基甲酸酯5.0g溶于50mL甲醇中，攪拌下加入0.5g、含Pd質量百分10％的工業品Pd/C催化劑，通入氫氣，室溫反應8h，抽濾，減壓蒸餾，甲醇重結晶得片狀晶體2-異丙氧基-5-氨基苯基-N-甲基氨基甲酸酯Hapten?1；

及c)、4-[4-異丙氧基-3-(N-甲基氨基甲酸酯基)苯胺基]-4-羰基丁酸Hapten?2的合成：稱取4.48g?2-異丙氧基-5-氨基苯基-N-甲基氨基甲酸酯Hapten?1，2.1g丁二酸酐于反應瓶中，無水吡啶100mL攪拌溶解，N₂保護，50℃下反應6h，反應液減壓蒸餾，得土灰色粘稠物質；

粘稠物用質量濃度10％的NaHCO₃溶液溶解，用稀鹽酸調節溶液pH2，析出絮狀固體，乙酸乙酯重結晶，得白色固體4-[4-異丙氧基-3-(N-甲基氨基甲酸酯基)苯胺基]-4-羰基丁酸Hapten2。

4、權利要求2所述的殘殺威人工抗原1的制備方法，其特征在于：

按下述化學反應式進行殘殺威人工抗原1的合成：

Hapten1??????????????????????人工抗原1

稱取22.4mg殘殺威半抗原Hapten1于50mL的燒瓶中，加入4mL?DMF溶解，再加入0.5M?HCl溶液2mL和0.1M?NaNO₂溶液1.2mL，4℃下攪拌反應30min，燒瓶中加入3.6mg尿素，繼續攪拌5min，得殘殺威半抗原Hapten?1重氮化組分；

稱取240mg牛血清白蛋白溶解于30mL?0.15M、pH8.7的硼酸鹽緩沖溶液中，4℃下，將制備的重氮化組分逐滴加入到牛血清白蛋白溶液中，攪拌12h，之后將偶聯液裝入透析袋中，4℃下，于0.01M、pH7.5的PBS緩沖溶液中攪拌透析，每天換3次透析液，共透析4-6天，透析結束后將透析袋中乳狀液分裝于1mL的離心管中，于-20℃冰箱中存放備用，即為殘殺威人工抗原Hapten1-BSA。

5、權利要求2所述的殘殺威人工抗原2的制備方法，其特征在于：按下述化學反應式進行殘殺威人工抗原2的合成：

Hapten2???????????????????????????人工抗原2

稱取17.5mg殘殺威半抗原Hapten2加入到50mL燒瓶中，加1mL?DMF溶解，接著加入三正丁胺15.39μL，氯甲酸異丁酯8.4μL，室溫下攪拌反應1h，得殘殺威半抗原Hapten?2活性液；

稱取100mg牛血清白蛋白溶于6mL?0.05M、pH9.6的碳酸鹽緩沖溶液中，并將上述的活性液滴加到牛血清白蛋白溶液中，室溫下攪拌2-3h，將偶聯液裝入透析袋中，于4℃下0.01M、pH7.5的PBS緩沖溶液中攪拌透析，每天換3次透析液，共透析4-6天，透析結束后將透析袋中透明液體分裝于1mL的離心管中，于-20℃冰箱中存放備用，即為殘殺威人工抗原Hapten?2-BSA。