[發明專利]高靈敏的檢測奶粉中三聚氰胺的方法

無效

• 申請號: 200910029572.1
• 申請日: 2009-03-25
• 公開（公告）號: CN101520431A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 徐琴;袁愛菊;胡效亞
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N27/44
• 分類號: G01N27/44;G01N21/78
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所
• 代理人: 江 平

技術領域

本發明涉及化學傳感器、生物傳感器技術領域。

背景技術

三聚氰胺是一種用途廣泛的有機化工中間產物，最主要的用途是作為生產三聚氰胺/甲醛樹脂(MF)的原料。由于其含氮量達66％左右，一些不法企業在飼料中大量添加三聚氰胺，造成飼料中粗蛋白質虛高的假相，不僅對養殖業產生不利影響，對人類健康也存在著嚴重威脅。2007年3月中旬以來，美國發生多起貓、狗寵物中毒死亡事件，經調查是由于寵物食品中含有三聚氰胺所引起的。2008年，三鹿奶粉事件，引發全國震驚。9月16日國務院有關部門負責人公布的國家質檢總局組織的專項檢查結果，更讓人瞠目結舌。對109家生產嬰兒奶粉產品企業的491批次嬰幼兒奶粉進行了檢驗，其中22家企業69批次檢出含量不同的三聚氰胺，其中石家莊三鹿牌嬰幼兒奶粉三聚氰胺含量很高，最高的達2563毫克/公斤。其他品牌的嬰幼兒奶粉也陸續有相關事件。三聚氰胺，一時間讓“食品安全”再次推倒了風口浪尖，因此亟需建立方便靈敏的方法對奶粉中三聚氰胺含量進行測定。

傳統的檢測三聚氰胺的方法有升華法、重量法等。GB9567-1988中采用重量法測定三聚氰胺的含量。該方法的缺點是操作繁瑣，分析時間長(約為8h)，測定低含量三聚氰胺時誤差大。現在常用的檢測三聚氰胺的方法多為色譜法與其他技術聯用，如HPLC-MS等，但這些方法往往需要比較復雜的儀器，而且過程繁瑣，靈敏度受樣品凈化、濃縮等步驟的影響。基于抗體抗原免疫反應的免疫學檢測技術是最近發展的另外一種新方法，但是這種方法的靈敏度不高，同時受生物分子穩定性的影響，操作要求比較高。

發明內容

本發明目的在于發明一種簡便方便、比較靈敏的方法對奶制品中的三聚氰胺進行測定。

本發明采用電化學方法對檢測樣品奶粉溶液進行電解，將電解后的電極先后經戊二醛溶液和辣根過氧化物酶溶液浸泡，然后通過顯色液顯色，定性、定量分析檢測樣品中三聚氰胺的濃度。

本發明通過電化學方法將奶粉中的三聚氰胺富集到電極表面，利用戊二醛和胺的交聯作用，將辣根過氧化物酶固定到電極的表面。在過氧化氫存在的情況下，利用辣根過氧化物酶催化愈創木酚氧化，形成有色產物，顯色終止后，測定樣品的吸光度。該值與電極表面組裝的辣根過氧化物酶的量成正比關系，而電極表面組裝的辣根過氧化物酶的量又與溶液中三聚氰胺的濃度成正比關系，通過觀察顯色顏色可以定性、定量檢測樣品中三聚氰胺的濃度。

本發明專利的有益效果是：本發明將電化學富集技術與顯色反應相結合，方法簡便、快捷，檢測靈敏，成本低廉。

為了獲得電解液，檢測前先采用體積濃度為45～55％的乙腈溶液與奶粉混合，經超聲溶解后，過濾，取上清液，調節上清液pH值至0～1，作為電化學方法的電解液。

另外，采用直徑為0.22μm的濾膜過濾。

將電化學方法處理后的電極取出后，依次于戊二醛溶液和辣根過氧化物酶溶液中分別浸泡1～2小時，取出電極，浸入顯色液5～60min，終止顯色。

上述顯色液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺或2，2′-邊氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)或愈創木酚任選其一與過氧化氫溶液的混合物。

上述戊二醛溶液的濃度為1％～2.5％。

上述辣根過氧化物酶溶液的濃度為1～10mg/ml。

另，為了快速、靈敏地分析測定，本發明電化學方法中，掃描速度100mv/s，掃描30圈。或在電位大于0.6V的條件下處理300秒。

附圖說明

圖1為顯色效果圖片。

圖2為三聚氰胺標準溶液的線性關系圖。

具體實施方式

1、樣品前處理：

溶液制備：將乙腈溶解在等體積的二次水溶液中，形成乙腈溶液，待用。

準確稱取一定質量奶粉樣品，往樣品中加入乙腈溶液，超聲溶解后，4000rpm離心10分鐘，用0.22μm的濾膜過濾，取上清液，用鹽酸調節pH＝0～1，即為實驗用電解液。

2、采用電化學方法對樣品進行富集：

可以采用循環伏安法或者恒電位法將電極置于以上電解液中，為了快速靈敏的分析測定，選擇掃描速度100mv/s，掃描30圈。如奶粉中含有三聚氰胺，則在電極表面可見三聚氰胺富集在電極表面形成的一層薄膜。

3、浸泡、顯色：

顯色液準備：可以由鄰苯二胺和過氧化氫組成的混合物，也可以由四甲基聯苯胺和過氧化氫組成的混合物，也可以由2，2′-邊氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)和過氧化氫組成的混合物，也可以由愈創木酚和過氧化氫溶液的混合物。