[發明專利]一種惡性黑素瘤T細胞納米抗體、其編碼序列及應用

有效

• 申請號: 200910027803.5
• 申請日: 2009-05-15
• 公開（公告）號: CN101550191A
• 公開（公告）日: 2009-10-07
• 發明（設計）人: 王大升
• 申請（專利權）人: 無錫勝博生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/21;G01N33/577;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 李紀昌

一、技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，特別涉及一種針對惡性黑素瘤T細胞抗原表位多肽Mart1多肽的納米抗體。

二、背景技術

惡性黑素瘤發病率不高，但是是一種表皮或粘膜的黑素細胞的惡性腫瘤，惡性程度高，且易發生血行及淋巴轉移，預后不良。據上海腫瘤醫院的資料，本病占皮膚惡性腫瘤的10％，占全部腫瘤的1-2％，近年來有增加趨勢。治療措施：手術切除，放射治療，化學治療(用于有轉移者)和免疫療法(如用卡介苗、白介素II、α-干擾素等作為輔助治療)或綜合以上四種方法結合治療《http://www.biox.cn/content/20050910/37264.htm》。國外近年在臨床試用惡性黑素瘤T細胞抗原表位多肽(gp100，Mart1)的疫苗，其效果也還不能最終肯定。納米抗體技術，是生物醫學科學家在傳統抗體的基礎上，運用分子生物學技術結合納米粒子科學的概念，進行的抗體工程革命，而研發的最新和最小的抗體分子，最初由比利時的科學家(Hamers，R)在駱駝血液中發現。普通的抗體蛋白由兩條重鏈與兩條輕鏈組成，而從駱駝血液中發現的新型抗體只有兩條重鏈，沒有輕鏈，這些“重鏈抗體”能像正常抗體一樣與抗原等靶標緊緊結合，而且不像單鏈抗體那樣互相黏連聚集成塊。以該“重鏈抗體”為基礎的納米抗體不僅分子量只有普通抗體的1/10，而且化學性質也更加靈活，能與酶的活性部位和細胞膜中鑲嵌的標志等特殊的或不暴露的抗原表位結合在一起，因而應用納米抗體技術研發新穎腫瘤治療和檢測試劑具有廣闊的前景。

三、發明內容

技術問題：

本發明的目的是提供一種針對惡性黑素瘤T細胞抗原表位的納米抗體，同時提供該納米抗體的編碼序列以及該納米抗體在制備檢測和治療惡性黑素瘤的藥物組合物中的應用。

技術方案：本發明的技術解決方案為：即：

在本發明的第一方面，提供了一種惡性黑素瘤T細胞納米抗體V_HH鏈，它的互補決定區CDR具有選自下組的CDR的氨基酸序列：

SEQ?ID?NO：11所示的CDR1，SEQ?ID?NO：12所示的CDR2，SEQ?ID?NO：13所示的CDR3；或

SEQ?ID?NO：14所示的CDR1，SEQ?ID?NO：15所示的CDR2，SEQ?ID?NO：16所示的CDR3；或

SEQ?ID?NO：17所示的CDR1，SEQ?ID?NO：18所示的CDR2，SEQ?ID?NO：19所示的CDR3；或

SEQ?ID?NO：20所示的CDR1，SEQ?ID?NO：21所示的CDR2，SEQ?ID?NO：22所示的CDR3；或

SEQ?ID?NO：23所示的CDR1，SEQ?ID?NO：24所示的CDR2，SEQ?ID?NO：25所示的CDR3。

較佳地，所述的惡性黑素瘤T細胞納米抗體V_HH鏈具有SEQ?ID?NO：1、2、3、4或5所示的氨基酸序列。

在本發明的第二方面，提供了一種惡性黑素瘤T細胞納米抗體，它針對惡性黑素瘤T細胞抗原表位Mart1多肽GAAGIGILIV，包括兩條具有SEQ?ID?NO：1、2、3、4或5所示的氨基酸序列的V_HH鏈。

在本發明的第三方面，提供了一種DNA分子，它編碼選自下組的蛋白質：本發明所述的惡性黑素瘤T細胞納米抗體V_HH鏈或惡性黑素瘤T細胞納米抗體，較佳地，所述DNA分子具有選自下組的DNA序列：SEQ?ID?NO：6、7、8、9或10。

在本發明的第四方面，提供了一種表達載體，它含SEQ?ID?NO：6、7、8、9或10所示的核苷酸序列，還包含與所述核苷酸序列操作性相連的表達調控序列。

在本發明的第五方面，提供了一種宿主細胞，其含本發明所述的表達載體。

在本發明的第六方面，提供了本所述惡性黑素瘤T細胞納米抗體用于檢測惡性黑素瘤的用途。

本發明的最后一方面，提供了一種檢測和治療惡性黑素瘤的藥物組合物，其含有藥學上有效量的本發明所述的惡性黑素瘤T細胞納米抗體以及藥學上可接受的載體。

有益效果：

本發明針對惡性黑素瘤特異性的T細胞抗原表位多肽如Mart1多肽-GAAGIGILIV生物素化后，與親和素磁珠結合，展示多肽的正確空間結構，以此形式的抗原篩選非免疫納米抗體基因庫(駱駝重鏈抗體噬菌體展示基因庫)，而獲得了針對惡性黑素瘤特異性的納米抗體基因，將此基因與表達載體重組，構建了能在大腸桿菌中高效表達的納米抗體株。

四、附圖說明