[發(fā)明專利]一種生物拆分L-薄荷醇反應(yīng)中提高底物濃度的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200910026722.3 | 申請日： | 2009-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN101545002A | 公開（公告）日： | 2009-09-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 喻曉蔚;徐巖;顧鴻 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12P41/00 | 分類號： | C12P41/00;C12P7/22;C12R1/845;C12R1/72;C12R1/39;C12R1/01 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122江蘇省無錫市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 生物 拆分 薄荷醇 反應(yīng) 提高 濃度 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
一種生物拆分L-薄荷醇反應(yīng)中提高底物濃度的方法，屬于生物法拆分外消旋化合物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
薄荷醇是目前最有工業(yè)價值的手性化合物之一，分別在醫(yī)藥、食品、化妝品和手性試劑制備等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。開展薄荷醇的拆分方法的研究極有意義。
天然薄荷醇受天氣、地域等影響，產(chǎn)量和質(zhì)量波動較大，合成薄荷醇則可以解決以上問題。近年來，生物學(xué)拆分方法已成為手性拆分的主流趨勢。
目前本研究室已經(jīng)從華根霉(Rhizopus?chinensis)CCTCC?M201021，米根霉(Rhizopus?oryzae)AS?3.41，近平滑假絲酵母CICC?1676，洋蔥布克氏菌(Burkholderia?cepacia)ATCC?25416，熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)AS1.823、熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)AS?1.55中篩選出能夠不對稱拆分DL-乙酸薄荷酯的菌種，但其存在較強(qiáng)的產(chǎn)物抑制作用，使得轉(zhuǎn)化的底物濃度過低，15g/L干菌體濃度，單批次轉(zhuǎn)化底物濃度最高為1％。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生物拆分L-薄荷醇反應(yīng)中提高底物濃度的方法，能夠提高單批次轉(zhuǎn)化底物濃度，提高產(chǎn)物L(fēng)-薄荷醇的產(chǎn)率。
本發(fā)明的技術(shù)方案：一種生物拆分L-薄荷醇反應(yīng)中提高底物濃度的方法，其特征是在不對稱拆分底物DL-乙酸薄荷酯反應(yīng)體系中，轉(zhuǎn)化菌株在華根霉(Rhizopus?chinensis)CCTCC?M201021(公開號CN1443841A已報道，2003年9月24日公開)，米根霉(Rhizopus?oryzae)AS?3.41，近平滑假絲酵母CICC?1676，洋蔥布克氏菌(Burkholderia?cepacia)ATCC?25416，熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)AS?1.823、或熒光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)AS?1.55中獲得，添加樹脂HZ-801、HZ-816、D-315、D-202、D-406、HD-81、NKA-II、DA-201之一種，底物質(zhì)量濃度5％-6％，樹脂添加量為底物DL-乙酸薄荷酯等質(zhì)量，體系pH5.0～8.0，控制溫度25～35℃，樹脂在反應(yīng)開始2～4h后加入，搖床反應(yīng)12～48h，轉(zhuǎn)化率達(dá)45％～48％，L-薄荷醇的光學(xué)純度為92％ee～100％ee。
本發(fā)明從篩選樹脂出發(fā)，篩選出能以一定速率吸附和釋放產(chǎn)物，降低產(chǎn)物對反應(yīng)的抑制作用，提高菌種單批次轉(zhuǎn)化效率的樹脂。在此基礎(chǔ)上，對該樹脂的添加量、添加時間，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時間等條件進(jìn)行優(yōu)化。
主要試劑：
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DL-薄荷醇和DL-乙酸薄荷酯分析方法的確定
L-薄荷醇、D-薄荷醇、L-乙酸薄荷酯、D-乙酸薄荷酯標(biāo)樣在β-DEX-120色譜柱(購于美國Supelco公司)上，通過帶有FID檢測器的手性氣相色譜(Varian3900)進(jìn)行分析。L-乙酸薄荷酯的保留時間為19.6min，D-乙酸薄荷酯的保留時間為20.6min，D-薄荷醇的保留時間為20.8min，L-薄荷醇的保留時間為21.1min。
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