[發(fā)明專利]桔梗花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基及利用其測定花粉活力的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910023683.1
• 申請日: 2009-08-25
• 公開（公告）號: CN101633902A
• 公開（公告）日: 2010-01-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉自剛;呼天明;楊亞麗;薛粉麗;劉鳳霞
• 申請（專利權(quán)）人: 商洛學(xué)院
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12Q1/06;G01B5/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陸萬壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物花粉活力測定技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種桔梗花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以及基于該液體培養(yǎng)基的利用桔梗花粉的離體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法。

背景技術(shù)

桔梗(Platycodon?grandiflorum(Jacq.)A.DC)屬于桔梗科、桔梗屬，為多年生雙子葉草本植物，是一種藥、食、賞兼用植物。桔梗根部可入藥，其主要活性成分是皂甙，具有鎮(zhèn)咳、抗炎、降血壓、降血糖、減肥、抗腫瘤、提高人體免疫力等廣泛的藥理活性。桔梗嫩苗、根均可食用，在我國東北地區(qū)以及日本、韓國、朝鮮等東亞國家是一種常見蔬菜，具有很高的營養(yǎng)價值。桔梗花期長，花色鮮艷，有紫色、白色、黃色和粉色等多種；花冠鐘形，合瓣花，近年還發(fā)現(xiàn)漏斗形花冠桔梗和重瓣桔梗2個變種，提高了桔梗的觀賞價值。

近年來，隨著桔梗抗衰老、抑癌、抗蟲殺菌和氣味掩飾劑等功效相繼被發(fā)現(xiàn)，促使對桔梗原材料的需求迅速增加，單靠野生桔梗資源已不能滿足需求。在此情況下，各地普遍開展了桔梗野生種馴化和種質(zhì)資源基礎(chǔ)研究。豐富的種質(zhì)資源是進(jìn)行桔梗遺傳研究和種質(zhì)改良的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有特異性狀桔梗種質(zhì)的研究鑒定及其保存是科學(xué)開展良種培育的前提。鑒于桔梗花粉作為桔梗遺傳資源的主要載體，因此，進(jìn)行桔梗花粉活力測定的研究，對桔梗種質(zhì)資源保存與創(chuàng)新、優(yōu)良品種的選育具有非常重要的理論和實踐意義。

桔梗為兩性花，開花后花粉成熟并自花粉囊中散出附著在花藥與柱頭上，成熟的花粉粒具有一定的活力，在田間條件下其活力能保持一定時間，但隨時間的推移其活力會發(fā)生一定的變化，了解桔梗開花后花粉活力在田間的變化規(guī)律，對桔梗雜交體系的建立以及桔梗傳粉類型的花粉都具有十分重要的意義。目前，花粉活力測定的方法主要有顯微鏡形態(tài)觀察法、染色法、離體萌發(fā)法等。

形態(tài)觀察法是依據(jù)不育花粉在生長過程中由于受到某些因素的影響，發(fā)育不完全或不良的花粉粒形態(tài)常常呈畸形，而正常花粉有規(guī)則的外形。桔梗正常花粉粒為正五邊形或六邊形，而不育花粉呈不規(guī)則形，根據(jù)形態(tài)可以鑒別花粉生活力。然而，桔梗花粉成熟后常常需要貯藏一段時間，貯藏過程中花粉活力會逐漸下降，由于桔梗正常花粉在貯藏過程中活力可能喪失，但形態(tài)并不發(fā)生明顯變化；從而使得花粉粒形態(tài)觀察法就不能鑒別貯藏后正常花粉活力變化情況。

染色法是通過使用染色試劑對花粉粒進(jìn)行染色，依據(jù)顏色變化判斷花粉活力的高低，常用的染色試劑有I2-KI溶液和氯化三苯基四氮唑(TTC)等。用I2-KI溶液對發(fā)育良好的桔梗成熟花粉進(jìn)行染色，花粉粒而沒有被染成藍(lán)色，而呈淺黃褐色，表明I2-KI溶液染色法不能測定桔梗花粉活力；而TTC染色法測定花粉活力實驗重復(fù)性較差，會造成很大的實驗誤差，也不能準(zhǔn)確測定花粉的實際活力高低。

花粉離體萌發(fā)與花粉管生長測定結(jié)果較為穩(wěn)定，更能反應(yīng)花粉活力的實際狀況。但花粉離體萌發(fā)需要適宜的培養(yǎng)基，常用的培養(yǎng)基基本成分是糖和硼，蔗糖濃度一般為10％～20％，硼酸為0.001％～0.005％，pH?5.5～6.5。

不同植物花粉萌發(fā)需要的培養(yǎng)基種類和濃度不同，二核型花粉較易萌發(fā)，在一般基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可，而三核型花粉較難萌發(fā)，要在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加其它促進(jìn)花粉萌發(fā)的元素，如Ca²⁺，Mg²⁺，K²⁺，PEG等成分。近年來，人們對藥用植物花粉離體萌發(fā)和花粉管生長進(jìn)行了較多研究，趙宏波等認(rèn)為PEG對菊花、梅花花粉離體萌發(fā)生長具有顯著促進(jìn)作用；牛東玲等報道了肉蓯蓉花粉離體萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基，陳和明等研究了黃藤花粉離體萌發(fā)條件及低溫貯藏對花粉活力的影響。然而，關(guān)于桔梗花粉離體萌發(fā)與花粉管生長的研究國內(nèi)外尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的問題在于提供一種桔梗花粉的離體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法，在確定桔梗花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上，對桔梗花粉離體培養(yǎng)，可靠、有效的測定桔梗花粉活力。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種桔梗花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以蒸餾水為溶劑，其包含的組分為ME₃、BK、100g·L^-1的蔗糖和150g·L^-1的PEG，PH為5.8；