[發明專利]一種腺病毒載體介導的立體狀態牙胚成釉細胞基因轉染方法

無效

• 申請號: 200910022995.0
• 申請日: 2009-06-19
• 公開（公告）號: CN101586121A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 段小紅;毛勇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 陸萬壽

1.一種腺病毒載體介導的立體狀態牙胚成釉細胞基因轉染方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將分離到的初生牙胚牙尖向上置于Transwell內置小室的微孔濾膜上，Transwell內置小室位于含有牙胚培養液的孔板內；所述牙胚培養液為：BGJb培養液，還包含體積分數為0.1％的胎牛血清、100IU/ml的青霉素、80μg/ml鏈霉素和5mg/L肝素；每孔中加入1ml牙胚培養液，在37℃、體積分數為5％的CO₂孵育箱飽和濕度下培養；

2)以包含GFP基因的腺病毒載體AAV-GFP感染人胚腎AAV-293細胞，產生具有傳染性的病毒顆粒，將病毒顆粒與牙胚培養液混和制備成病毒濃度為500～5000?MOI的感染液；

3)將感染液加入培養有牙胚的Transwell內置小室，感染后48小時，移去感染液，牙胚繼續用牙胚培養液培養，并每天更新牙胚培養液；

4)當牙胚的表層出現綠色熒光時，結合釉原蛋白的免疫染色，在牙胚上定位GFP和釉原蛋白共表達的牙胚成釉細胞。