[發明專利]用于防治獼猴桃細菌性潰瘍病的內生鏈霉菌及其制備方法

無效

• 申請號: 200910021083.1
• 申請日: 2009-02-10
• 公開（公告）號: CN101486982A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發明（設計）人: 黃麗麗;涂璇;康振生;高小寧;申哲
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/52;A01N63/02;A01P1/00;C12R1/465
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司
• 代理人: 李文義

技術領域

本發明屬于生物農藥技術領域，具體涉及一種用于防治獼猴桃細菌性潰瘍病的內生鏈霉菌及其制備方法。

背景技術

獼猴桃細菌性潰瘍病是由丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種(Pseudomonassyringae?pv.actinidiae)侵染引起的獼猴桃上的重要病害，該病一旦發生流行，不僅影響獼猴桃的產量和果品質量，嚴重時常常造成毀園，給獼猴桃產業帶來巨大損失。獼猴桃細菌性潰瘍病于1980年在美國加利福尼亞州和日本神州景崗縣首次發現，而我國湖南的東山峰農場在1985年發現該病，當時造成2000余畝果園瀕臨毀園。獼猴桃在我國陜西和安徽等省有著廣泛的種植，獼猴桃生產也是陜西省的重要水果產業之一，但從1991年起相繼在長安、戶縣、周至以及楊凌等獼猴桃產區發現了獼猴桃潰瘍病后，近年來該病有擴大流行的趨勢，給陜西省的獼猴桃產業帶來嚴重危機。獼猴桃細菌性潰瘍病多發生在春季傷流期至開花末期和秋季，可危害植株的主干、枝蔓、嫩梢、葉片、花蕾和花等部位。獼猴桃潰瘍病菌主要在藤蔓病枝上越冬，或隨病枝、病葉殘體在土壤中越冬，翌年3月開始發病，通過風雨、昆蟲、農具和農事操作進行傳播，從傷口和自然孔口侵入，3～5天后出現癥狀并產生菌膿進行再侵染，4月下旬出現發病高峰期。發病部位多從弱枝干的皮孔、芽基、葉痕、枝條分叉處開始，低溫高濕利于發病，農事操作和修剪時機械損傷愈多，病害發生愈重。

目前防治獼猴桃潰瘍病的藥劑主要是農用鏈霉素和石硫合劑，施納寧是陜西關中地區各植保站推廣的一種防治獼猴桃潰瘍病的新農藥，但田間防病效果均不理想，因而尋找開發新型、高效及安全的生物農藥將對獼猴桃產業的穩定和發展具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中存在的問題與缺陷，本發明的目的旨在尋求防治獼猴桃細菌性潰瘍病的內生鏈霉菌及活性產物的制備方法。

實現上述發明目的的技術方案具體如下：

楊凌青色鏈霉菌(Streptomyces?glaucus?sp.nov?yangling)TIASA5菌株(以下簡稱為TIASA5菌株)，該菌株已于2007年8月16日保藏在中國科學院微生物所菌株保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，保藏中心登記入冊編號為CGMCC?No.2132；保藏單位地址：北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101。

本發明還有一個目的是提供TIASA5菌株的制備方法，具體包括下列步驟：

1)將采自陜西楊凌的野生黃花蒿莖組織用清水洗凈后用吸水紙將水分吸干，在99％乙醇中浸1min，然后在濃度為3.125％的NaClO中浸6min，再次放入99％乙醇中浸30sec，最后用無菌生理鹽水沖洗5次；

2)將表面消毒后的待分離的黃花蒿莖組織用滅菌刀片切成0.2mm長的小段，置于高氏一號平板上，28℃培養箱培養21～28d后統計放線菌菌落數并用劃線法進行純化成單菌落；

3)將純化后的單菌落經過如下發酵：將在黃豆粉平板上活化培養5～7d的菌苔平板用打孔器打成直徑為6mm的菌餅，接入黃豆粉培養基中，28℃，150r/min培養36h后，按12％的接種量將種子液接入黃豆粉培養基中，30℃，180r/min發酵72～96h，將培養好的發酵液以10000r/min離心30min，取上清液，將制得的上清液用管碟法進行拮抗性篩選，獲得廣譜抗菌效果明顯的拮抗菌株TIASA5。

所述的高氏一號由可溶性淀粉20g，KNO₃?1g，K₂HPO₄?0.5g，NaCl?0.5g，MgSO₄·7H₂O?0.5g，FeSO₄·7H₂O?0.01g，瓊脂粉13g，蒸餾水1000mL組成，且pH為7.2。

所述的黃豆粉培養基：可容性淀粉5g、蔗糖10g、蛋白胨2g、酵母膏2g、NaCl?2g、K₂HPO₄?0.5g、MgSO₄·7H₂O?0.5g、CaCO₃?1g、黃豆粉20g煮沸30min過濾、水1000mL、pH為7.2～7.4。

本發明還有一個目的是提供TIASA5菌株的抗菌活性物質，它是按照下列方法制備的：