[發明專利]一種柳穿魚黃酮及其總黃酮的制備方法和用途

有效

• 申請號: 200910010324.2
• 申請日: 2009-02-09
• 公開（公告）號: CN101475619A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 劉曉秋;華會明;關宏峰;蘭洲
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07D311/30;C07D311/40;A61K31/7048;A61K31/352;A61K36/80;A61P9/00;A61P11/14;A61P11/06
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司
• 代理人: 李宇彤

1.一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)?預處理：將采收后的柳穿魚藥材曬干后切段，得到的柳穿魚生藥備用；

???2)?提取：加入5~12倍生藥量的50～90％的提取溶劑進行回流提取1~4次，每次提取時間為0.5~3h，濾過，合并濾液；或加入5~10倍生藥量的50～90％的提取溶劑冷浸12h～48h，濾過，合并濾液；或加入5~10倍量的50～90％的提取溶劑浸潤4~24小時，使藥材粗粉充分膨脹，分次均勻地裝入底部墊有脫脂棉的滲漉器中，每次裝好后用木棒壓緊，上面蓋上紗布，并壓上一層洗凈的小石子，以免加入提取溶劑后使藥粉浮起，然后打開滲濾器下口的開關，再慢慢地從滲漉器上部加進提取溶劑，當液體自下口流出時關閉上口開關，加蓋，打開下口開關，使滲漉液緩緩流出，滲漉速度為2~5ml/min,收集滲漉液，過濾，合并濾液，所述的提取溶劑為甲醇、乙醇或丙酮；

???3)?濃縮：將步驟2)?得到的濾液濃縮干燥，得到柳穿魚提取浸膏；

4)?上柱：將步驟3)?得到的浸膏以0.3~0.5g/ml上樣于AB-8或HPD-600或D101型大孔樹脂，上樣流速為1~3BV/h，分別采用柱徑高比為1：3~1：7的大孔吸附樹脂，上樣濃度為0.3~0.5g/ml，用30%~90%的濃度乙醇溶液進行洗脫；

5）制備：將收集到的乙醇濃度為90%洗脫液過濾，合并濾液，濃縮干燥，得到柳穿魚的總黃酮提取物；

6）純化：將步驟4)得到的不同乙醇洗脫部分經硅膠色譜柱、聚酰胺色譜柱或凝膠色譜柱，用三氯甲烷或二氯甲烷或甲醇或乙醇或水或它們之間的不同比例的組合洗脫，分別得到橙皮苷、柳穿魚苷、柳穿魚苷元和刺槐素。

2.根據權利要求1所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所述步驟2)?的提取溶劑為乙醇;?提取方式為回流，且回流提取方法是以90％乙醇提取3次，每次提取時間為1.5h。

3.根據權利要求1所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所述步驟4)?的大孔樹脂柱為HPD-600型樹脂，上樣濃度為0.5g/ml，流速為3BV/h，柱徑高比為1：5，乙醇濃度為30%、50%或90%。

4.根據權利要求1所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所述步驟6）中將步驟4）得到的30%乙醇洗脫部分流經聚酰胺柱色譜，用二氯甲烷：甲醇=30：1進行洗脫，洗脫液進行過濾，合并濾液，濃縮干燥，得到如式I的橙皮苷，純度在95%以上，

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5.根據權利要求1所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所述步驟6）中將步驟4）得到的50%乙醇洗脫部分流經反復硅膠柱色譜，用二氯甲烷：甲醇=10：1進行洗脫，合并洗脫部分，得到的洗脫部分再經過Sephadex?LH-20柱色譜,用甲醇進行洗脫，洗脫液進行過濾，合并濾液，濃縮干燥，得到如式II的柳穿魚苷，純度在95%以上；將得到的90%乙醇洗脫部分經過硅膠柱色譜、用二氯甲烷：甲醇=70：1進行洗脫，合并洗脫部分，得到的洗脫部分再經過聚酰胺柱色譜、用二氯甲烷：甲醇=100：1進行洗脫，合并洗脫部分，得到的洗脫部分再流經Sephadex?LH-20柱色譜，用二氯甲烷進行洗脫，洗脫液進行過濾，合并濾液，濃縮干燥，得到如式II的柳穿魚苷元和刺槐素，純度在95%以上，

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柳穿魚苷?????R=OCH₃???R₁=?-glc(6→1)rha

柳穿魚苷元???R=?OCH₃???R₁=H

刺槐素???????R=?H???????R₁=H?。

6.????????根據權利要求1所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所制備的柳穿魚總黃酮的含量占柳穿魚總黃酮提取物的60%以上。

7.?????根據權利要求1-6中任一項所述的一種柳穿魚中黃酮類化合物及其總黃酮的制備方法，其特征在于：所述的柳穿魚總黃酮以柳穿魚苷為主，其中柳穿魚苷的含量在20%以上。