[發明專利]一種檢測人乳頭瘤病毒中和抗體的方法

無效

• 申請號: 200910001113.2
• 申請日: 2009-01-22
• 公開（公告）號: CN101551392A
• 公開（公告）日: 2009-10-07
• 發明（設計）人: 程通;鄭舟;周國棟;杜海蓮;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;養生堂有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/533
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

1、高通量檢測被HPV假病毒或病毒感染的細胞的方法，包括：(1)使被HPV假病毒或病毒感染的細胞帶有適于斑點檢測儀器(或，斑點檢測法)檢測的信號，但未被感染的細胞不帶有該信號；和(2)通過使用斑點檢測儀器(或，通過以斑點檢測法)檢測該信號來檢測被HPV假病毒或病毒感染的細胞。

2、權利要求1的方法，用于被HPV假病毒或病毒感染的細胞的計數。

3、通過使樣品中可能存在的人乳頭瘤病毒中和抗體與人乳頭瘤病毒假病毒或病毒接觸以阻止人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒感染細胞(通常是培養細胞)，并檢測被人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒感染的細胞，來檢測樣品中的人乳頭瘤病毒中和抗體的方法，其特征在于：采用權利要求1或2的方法來檢測被人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒感染的細胞。

4、權利要求3所述方法，其中所述樣品為來自待檢個體的分離的生物學樣品，優選所述樣品為血清；或來自組織培養的生物學樣品。

5、權利要求3-4任一項所述方法，其中所述方法用于檢測樣品中人乳頭瘤病毒中和抗體的存在與否和/或其效價。

6、權利要求1-5之任一項所述的方法，其中所述斑點檢測法中檢測數據是通過使用斑點檢測儀器獲得的，斑點檢測儀器能夠用于從細胞群體中分辨和測算產生特定信號(例如顏色)的細胞的數量，優選Elispot。

7、權利要求1-6之任一項所述的方法，其中使感染細胞產生能夠被斑點檢測儀器檢測的信號是通過如下方法獲得的：報告基因表達元件在感染細胞中表達產生報告蛋白，該報告蛋白可直接產生或間接(例如通過顯色反應)產生能夠被斑點檢測儀器檢測的信號。

8、權利要求7所述的方法，其中所述的報告基因在感染細胞中的表達是通過人乳頭瘤病毒假病毒或病毒感染細胞實現的；報告基因表達元件可通過帶有報告基因表達元件的人乳頭瘤病毒假病毒感染細胞而導入細胞中表達，或者，也可通過人乳頭瘤病毒假病毒或病毒感染帶有報告基因表達元件的細胞后激活該報告基因表達元件表達，優選帶有報告基因表達元件的人乳頭瘤病毒假病毒的方式。

9、權利要求1-8之任一項所述的方法，其中所述的報告基因為其表達產物可以直接或間接導致產生能夠被斑點檢測儀器檢測的信號的基因，如β半乳糖苷酶基因等。

10、權利要求1-9之任一項所述的方法，其包括以下步驟：

A)將細胞培養于固相培養載體(例如細胞培養皿、細胞培養板等，優選細胞培養板，更優選96孔細胞培養板)上，作為人乳頭瘤病毒或人乳頭瘤病毒假病毒感染的靶細胞；所述細胞為動物細胞，特別是哺乳動物細胞，也可是一種改造的細胞，其可在人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒感染后表達報告蛋白；

B)根據所需要檢測的人乳頭瘤病毒中和抗體所屬的人乳頭瘤病毒型別，準備需要的人乳頭瘤病毒或人乳頭瘤病毒假病毒，例如帶有報告基因表達元件的人乳頭瘤病毒假病毒；

其中，A)中所述的細胞在被B)中所述的人乳頭瘤病毒或者人乳頭瘤病毒假病毒感染后能夠表達報告蛋白，該報告蛋白能直接產生或間接(例如通過顯色反應)產生能夠被斑點檢測儀器檢測的信號；

C)使待檢測樣品與步驟B)中所述的人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒接觸，使得樣品中的人乳頭瘤病毒中和抗體，如果存在的話，會與人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒結合，從而能夠阻止人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒對步驟A)中所述靶細胞的感染；該接觸在允許樣品中的中和抗體與人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒結合的條件下進行；

D)使步驟C)的產物(檢測樣品與人乳頭瘤病毒假病毒或人乳頭瘤病毒的混合液)和步驟A)的產物(培養于固相培養載體的細胞)接觸，該接觸在允許細胞正常生長的條件下進行；

E)應用斑點檢測儀器(如Elispot)，通過檢測帶有由報告蛋白直接或間接產生的信號的細胞，檢測被感染細胞的數量；

F)根據步驟E)獲得的結果測算樣品中是否有人乳頭瘤病毒中和抗體和/或其效價。