[發明專利]高純度馬抗狂犬病毒抗體F(ab')2片段

無效

• 申請號: 200910000966.4
• 申請日: 2009-01-23
• 公開（公告）號: CN101787079A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 李樹民;王福軍;趙翠波;莘旭妮
• 申請（專利權）人: 軍事醫學科學院軍事獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;A61P31/14;C12P21/06;C07K1/36
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備用于治療和預防狂犬病毒的抗狂犬病毒抗體F(ab’)2片段純品的方法，其特征在于該抗體F(ab’)2片段純品是由如下制備方法制成的：

1)使用狂犬病毒疫苗加入不完全福氏佐劑乳化制備免疫原，并配合干擾素α-2a和白細胞介素2，采用多點免疫馬匹，共免疫三次、間隔10天免疫一次。

2)采集馬抗狂犬病毒血漿，用生理鹽水稀釋1倍并加入20％飽和度硫酸銨混勻、離心棄沉淀，上清再加入10％飽和度硫酸銨混勻離心，收集沉淀。沉淀用20mM?PB，pH7.4溶解。

使用中空纖維超濾柱，截留分子量為50kD，進行濃縮，采用20mMPB，pH7.4，0.15M?NaCl對濃縮后的蛋白溶液進行換液，得到馬抗狂犬病毒IgG；

3)馬抗狂犬病毒IgG用稀鹽酸調PH值至4.5后使用胃蛋白酶進行酶切，然后用2mol/L?Tris-HCl，pH8.0調PH值至pH7.4，加熱58℃、30min，離心10000rpm，20min去除沉淀的Fc段，上清為初步純化的馬抗狂犬病毒抗體F(ab’)2片段。

4)初步純化的馬抗狂犬病毒抗體F(ab’)2使用Q?Sepharose?FastFlow層析介質，用20mM?PB，pH7.4平衡，上一步得到的樣品稀釋上樣，再次平衡后用20mM?PB，pH7.4，0～0.5M?NaCl梯度洗脫，得到進一步純化的抗狂犬病毒抗體F(ab’)2片段。

5)使用Sephacryl?S-100High?Resolution層析介質，使用20mMPB，pH7.4，0.15M?NaCl平衡，上一步得到的樣品上樣，平衡，收集目的蛋白峰，即得到純品的抗狂犬病毒抗體F(ab’)2片段。

2.通過權利要求1中的方法得到的抗狂犬病毒抗體F(ab’)2片段純品中F(ab’)2片段的純度大于99％，白蛋白的殘留檢測不出，抗體效價大于500IU/mL。