[發(fā)明專利]西方伊薩酵母菌株及其制備方法,以及用該菌株制備木糖醇、乙醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910000579.0
• 申請日: 2009-01-16
• 公開（公告）號: CN101805702A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張厚瑞;覃香香;蔡愛華;周玉恒;陳海珊
• 申請（專利權(quán)）人: 唐傳生物科技(廈門)有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P19/02;C12P7/10;C12R1/74;C12R1/645
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 李雁翔

1.一種微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株為西方伊薩酵母Issatchenkia?occidentalis(Lj-3)，CCTCC?NO：M206097。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株的26SrDNA?D1/D2區(qū)域核苷酸特征序列與GenBank登記號為EF030710的特征序列同源性為100％。

3.一種用于權(quán)利要求1或者2所述的微生物菌株的制備方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

S1.用蔗渣半纖維素水解物為分離培養(yǎng)基的基本成分，適當(dāng)真空后用堿調(diào)節(jié)pH?5-6，如果制成平板，外加瓊脂20g/L作為固形劑；

S2.從紙漿廠廢水污染的環(huán)境采集的土壤、淤泥作分離樣品，250ml三角瓶裝量25ml，接入廢水或淤泥分離樣品約1g，30℃，200rpm搖瓶富集培養(yǎng)72h；

S3.取有菌體生長的培養(yǎng)液在同一培養(yǎng)基平板上劃線分離，選擇能夠快速生長的類型，轉(zhuǎn)到斜面保存；

S4.斜面培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到半纖維稀酸水解物中并在搖瓶條件下培養(yǎng)24小時，離心除去菌體，然后接入能夠同化木糖的酵母菌株進行發(fā)酵，選留那些能夠有效改善半纖維素稀酸水解物發(fā)酵性能的脫毒活性菌株；

S5.按照上述步驟經(jīng)過十個以上批次的樣品分離，獲得改善半纖維素水解物發(fā)酵性能活性最強的一個分離物L(fēng)j-3；

S6.把按照上述步驟分離得到的菌株Lj-3于4℃冷藏或用凍干法保藏。

4.一種用于權(quán)利要求1或者2所述的微生物菌株的半纖維素水解物生物脫毒種子液制備方法，其特征在于，所述種子液制備方法包括如下步驟：

S1.制備培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組成為：葡萄糖50g/L，MgSO₄.7H₂O2g/L，K₂HPO₄?4g/L，KH₂PO₄?6g/L，酵母膏5g/L；

S2.將CCTCC?NO：M206097的斜面培養(yǎng)物接入液體種子培養(yǎng)基，裝液量為搖瓶容量的20％；

S3.在27--30℃，轉(zhuǎn)速200rmp條件下?lián)u床培養(yǎng)12～18小時，獲得可用于脫毒的種子液。

5.用權(quán)利要求1或者2所述的菌株制備木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.經(jīng)過CCTCC?NO：M206097發(fā)酵脫毒過的半纖維素水解物，真空濃縮至木糖約150g/L，氨水調(diào)節(jié)至pH＝6，另加入酵母膏5g/L，得到用于木糖醇發(fā)酵的半纖維素水解物培養(yǎng)基

S2.木糖醇發(fā)酵用搖瓶進行，搖瓶裝量10％，按5％(v/v)接種量接入熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)CCTCC?NO：M205067種子液，200rmp，33℃進行發(fā)酵至木糖消耗完；

S3.收集離心沉淀的菌體，投入到新鮮的半纖維素水解物培養(yǎng)基中繼續(xù)新一輪的木糖醇發(fā)酵，離心上清液制備木糖醇。

6.用權(quán)利要求1或者2所述的菌株對半纖維素水解物進行同步脫毒發(fā)酵生產(chǎn)木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.真空濃縮半纖維素水解物至木糖含量約100--150g/L，用堿(氫氧化鈣，或氨水)調(diào)至pH?3--pH7，離心或過濾除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纖維素水解物培養(yǎng)基；

S2.取培養(yǎng)好的CCTCC?NO：M206097種子液，與等體積的CCTCC?NO：M205067種子液混合，然后按5％(v/v)和用種量接入半纖維素水解物中，搖瓶培養(yǎng)至木糖消耗完；

S3.離心收集沉淀的酵母細(xì)胞并用于新鮮的培養(yǎng)基中，繼續(xù)同步脫毒發(fā)酵。如此不斷地循環(huán)，直至酵母細(xì)胞不能利用。

7.用權(quán)利要求1或者2所述的菌株對半纖維素水解物進行同步脫毒發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，其特征在乎，包括如下步驟：

S1.真空濃縮半纖維素水解物至木糖含量約100--150g/L，用堿(氫氧化鈣，或氨水)調(diào)至pH?3--pH7，離心或過濾除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纖維素水解物培養(yǎng)基；

S2.取培養(yǎng)好的CCTCC?NO：M206097種子液，與等體積的CICC?1770種子液混合，然后按5％(v/v)和用種量接入半纖維素水解物培養(yǎng)基搖瓶中，培養(yǎng)至木糖消耗完；

S3.離心收集沉淀的酵母細(xì)胞循環(huán)用于發(fā)酵新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)同步脫毒發(fā)酵，如此不斷地循環(huán)，直至酵母細(xì)胞不能利用；

S4.蒸餾回收離心上清液中的乙醇。