[發明專利]N-末端氨基酸經修飾的促胰島素釋放肽衍生物

無效

• 申請號: 200880024892.1
• 申請日: 2008-07-16
• 公開（公告）號: CN101778863A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 鄭圣燁;林昌基;宋大海;裵城敏;金永勛;權世昌;李寬淳
• 申請（專利權）人: 韓美藥品工業株式會社
• 主分類號: C07K14/65
• 分類號: C07K14/65
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 林曉紅

[技術領域]

本發明涉及一種具有改良的促胰島素釋放活性的促胰島素釋放肽衍生物。特別是，本發明涉及一種具有高穩定性和促胰島素釋放活性的N-末端氨基酸經修飾的促胰島素釋放肽。

[背景技術]

由于肽穩定性低，會被體內蛋白水解酶降解，所以其很容易變性，因而喪失活性，并且其具有相對小的大小，從而易于經過腎。因此，為了保持含有作為藥物有效成分的肽的藥物的血液水平和滴度，必須經常給病人施用肽藥物以便維持所需要的血液水平和滴度。然而，肽藥物通常是以可注射制劑的形式施用，而且為了保持生理活性肽的血液水平所采取的頻繁施用會給病人帶來嚴重的疼痛。為了解決這些問題，已經進行了許多研究。其中一項研究提出的方法是增加通過生物膜的肽藥物的傳輸，于是肽藥物通過口咽或鼻咽吸入轉移進入機體。然而，這一方法與可注射制劑相比較，其體內轉移效率非常低，所以仍難于保持肽藥物的體內活性。

另一方面，許多研究針對改良肽藥物的血液穩定性以及長時間保持藥物在血液中的高濃度，從而最大化藥物的藥效。這種長效的肽藥物制劑因此需要增加肽藥物的穩定性并且要保持足夠高水平的滴度而不會在病人中產生免疫反應。

作為穩定肽以及抑制蛋白水解酶降解的方法，已進行了一些實驗來修飾對蛋白水解酶敏感的特異氨基酸序列。例如：GLP-1(7-37或7-36酰胺)，其功能是降低血液中葡萄糖濃度以治療2型糖尿病，其生理活性半衰期短，大約有4分鐘或更少(Kreymann等，1987)，這是由于二肽基肽酶IV(DPPIV)在第8位氨基酸(Ala)和第9位氨基酸(Asp)之間的裂解而使GLP-1滴度喪失。因此，許多研究在對DPP?IV具有抗性的GLP-1類似物方面進行，有些實驗用Gly取代Ala⁸(Deacon等，1998；Burcelin等，1999)，或用Leu或D-Ala取代Ala⁸(Xiao等，2001)，從而增加對DPP?IV的抗性，同時保持其活性。GLP-1的N-末端氨基酸His⁷對于GLP-1的活性是關鍵的，而且還是DPP?IV的靶。因此，美國專利No.5,545,618公開了用烷基或?；揎桸-末端，Gallwitz等公開了將His⁷進行N-甲基化、或者α-甲基化、或用咪唑將整個His取代以增加對DPP?IV的抗性并保持生理活性。盡管增加對二肽基肽酶的抗性從而改善了穩定性，但發現His⁷-修飾的衍生物在用相同濃度的較低的cAMP刺激時具有明顯降低的受體親合性(Gallwitz.等，Regulatory?Peptide?79：93-102(1999)，Regulatory?Peptide?86：103-111(2000))。

除GLP-1之外，毒蜥外泌肽(exendin)是在Arizona和Northern?Mexico常見的蜥蜴glia?monster毒液中發現的肽。毒蜥外泌肽-3存在于珠毒蜥(Heloderma?horridum)的毒液中，毒蜥外泌肽-4存在于毒蜥(Helodermasuspectum)的毒液中。毒蜥外泌肽與GLP-1有53％的高同源性(Goke等，J.Bio.Chem.，268：19650-55(1993))。據報道毒蜥外泌肽-4可以作用在特異性胰島素分泌細胞上的GLP-1受體，以及作用在豚鼠胰腺的分散的腺泡細胞，胃的胃壁細胞，并且所述肽也可以在分離的胃中刺激促生長素抑制素的釋放以及抑制促胃液素釋放。此外，毒蜥外泌肽-3和毒蜥外泌肽-4被報道發現在胰腺腺泡細胞中刺激cAMP生成以及刺激胰腺腺泡細胞的淀粉酶釋放。因為毒蜥外泌肽-4(美國專利No.5,424,686)具有His-Gly序列而不是作為GLP-1中二肽基肽酶底物的His-Ala，因此其對DPP?IV具有抗性而且比GLP-1具有更高的生理活性。因此，它的體內半衰期比GLP-1長，有2到4個小時。雖然天然毒蜥外泌肽比GLP-1具有增加的體內半衰期，但是它的生理活性仍然不足以持久。例如：在商購可得毒蜥外泌肽-4(exenatide)的情況中，需要每天給病人注射兩次，這對病人來說仍然是困難的。

為了改善天然毒蜥外泌肽的治療效力，進行了制備其類似物、衍生物和變體方面的嘗試。術語“類似物或變體”典型性地指通過在天然肽中或自天然肽中取代、缺失或插入一或多個氨基酸而制備的肽。術語“衍生物”指通過對天然肽的一或多個氨基酸進行烷基化、?；?、酯化或酰胺化制備的化學修飾的肽。