[發明專利]單鏈環狀RNA及制備該單鏈環狀RNA的方法

無效

• 申請號: 200880015108.0
• 申請日: 2008-05-09
• 公開（公告）號: CN101679962A
• 公開（公告）日: 2010-03-24
• 發明（設計）人: 阿部洋;伊藤嘉浩;阿部奈保子;豐福秀一
• 申請（專利權）人: 獨立行政法人理化學研究所;大塚制藥株式會社;林化成株式會社
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;A01H1/00;A01K67/027;A61K31/7105;A61K48/00;A61P35/00;A61P43/00;C12N15/09
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 李 波;郭文潔

1.一種具有持續或緩慢釋放的RNA干擾作用的單鏈環狀RNA，其特征在于所述單鏈環狀RNA包含有義鏈序列、與所述有義鏈序列互補的反義鏈序列、在所述有義鏈和反義鏈之間連接這兩條鏈的相同或不同的兩條環序列，其中所述有義鏈和反義鏈配對形成莖干。

2.根據權利要求1的單鏈環狀RNA，其中與其靶RNA的表達水平被設定為1的對照細胞相比，在將所述單鏈環狀RNA引入真核細胞后24小時，靶RNA的表達為0.4或更低。

3.根據權利要求1或2的單鏈環狀RNA，其中在人血清中8小時后，70％或更多的所述單鏈環狀RNA被保留。

4.一種制備根據權利要求1-3任一項的單鏈環狀RNA的方法，其包括合成有義鏈和反義鏈，兩者都包含在5’末端和3’末端具有未配對核苷酸的核苷酸序列，以及同時使用連接酶將所述有義鏈中具有未配對核苷酸的核苷酸序列的在5’末端的核苷酸與所述反義鏈中具有未配對核苷酸的核苷酸序列的在3’末端的核苷酸連接，反之亦然，

其中所述有義鏈的在5’末端具有未配對核苷酸的核苷酸序列和所述反義鏈的在3’末端具有未配對核苷酸的核苷酸序列彼此連接形成環，所述有義鏈的在3’末端具有未配對核苷酸的核苷酸序列和所述反義鏈的在5’末端具有未配對核苷酸的核苷酸序列彼此連接形成環，以及所述有義鏈和反義鏈配對形成莖干。

5.根據權利要求4的方法，其進一步包括磷酸化所述有義鏈中具有未配對核苷酸的核苷酸序列和所述反義鏈中具有未配對核苷酸的核苷酸序列的每個5’末端。

6.根據權利要求4或5的方法，其中所述環序列彼此相同或不同。

7.根據權利要求4-6任一項的方法，其中所述環長度為2-20個核苷酸。

8.根據權利要求4-7任一項的方法，其中所述莖干長度為19-31個核苷酸。

9.一種體外抑制編碼蛋白質的基因表達的方法，其包括將根據權利要求1-3任一項的單鏈環狀RNA引入人源細胞中，并以一種持續的方式通過所述單鏈環狀RNA減弱靶RNA，從而抑制所述靶RNA翻譯成蛋白質。

10.一種抑制編碼蛋白質的基因表達的方法，其包括將根據權利要求1-3任一項的單鏈環狀RNA引入非人動物、植物或它們的細胞中，并以一種持續的方式通過所述單鏈環狀RNA減弱靶RNA，從而抑制所述靶RNA翻譯成蛋白質。

11.一種藥物組合物，其包含作為活性成分的根據權利要求1-3任一項的單鏈環狀RNA。