[發明專利]具有經修飾的巖藻糖基化的糖蛋白的生產

無效

• 申請號: 200880014608.2
• 申請日: 2008-03-03
• 公開（公告）號: CN101679934A
• 公開（公告）日: 2010-03-24
• 發明（設計）人: S·哈米爾頓
• 申請（專利權）人: 格利科菲公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P21/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 梁 謀;黃可峻

1.一種重組巴斯德畢赤酵母宿主細胞，其包含巖藻糖基化途 徑，其中構成所述途徑的酶和活性是由編碼以下物質的核酸提供 的：GDP-甘露糖-脫水酶、GDP-酮基-脫氧-甘露糖-差向異構酶/GDP- 酮基-脫氧-半乳糖-還原酶、GDP-巖藻糖轉運體和包含與經密碼子優 化用于巴斯德畢赤酵母表達的釀酒酵母Mnn2的氨基酸1-36融合的 α1，6-巖藻糖基轉移酶EC2.4.1.68的催化結構域的融合蛋白。

2.權利要求1的宿主細胞，其中所述宿主細胞就糖蛋白上的N- 聚糖而言進一步不顯示α1，6-甘露糖基轉移酶活性并且包括與細胞靶 向信號肽融合的α1，2-甘露糖苷酶催化結構域，該信號肽通常與該催 化結構域無關并選用來將α1，2-甘露糖苷酶活性靶向宿主細胞的ER 或高爾基體。

3.權利要求2的宿主細胞，其進一步包括與細胞靶向信號肽融 合的GlcNAc轉移酶I催化結構域，該信號肽通常與該催化結構域 無關并選用來將GlcNAc轉移酶I活性靶向宿主細胞的ER或高爾 基體。

4.權利要求3的宿主細胞，其進一步包括與細胞靶向信號肽融 合的甘露糖苷酶II催化結構域，該信號肽通常與該催化結構域無關 并選用來將甘露糖苷酶II活性靶向宿主細胞的ER或高爾基體。

5.權利要求4的宿主細胞，其進一步包括與細胞靶向信號肽融 合的GlcNAc轉移酶II催化結構域，該信號肽通常與該催化結構域 無關并選用來將GlcNAc轉移酶II活性靶向宿主細胞的ER或高爾 基體。

6.權利要求5的宿主細胞，其進一步包括與細胞靶向信號肽融 合的β1，4-半乳糖基轉移酶催化結構域，該信號肽通常與該催化結構 域無關并選用來將β1，4-半乳糖基轉移酶活性靶向宿主細胞的ER或 高爾基體。

7.權利要求6的宿主細胞，其進一步包括與細胞靶向信號肽融 合的唾液酸轉移酶催化結構域，該信號肽通常與該催化結構域無關 并選用來將唾液酸轉移酶活性靶向宿主細胞的ER或高爾基體。

8.一種雜交載體，其包括：(a)在低等真核宿主細胞中具有 功能的DNA調控元件，該調控元件可操作地連接至(b)編碼融合 蛋白的DNA編碼序列，所述融合蛋白包含與α1，6-巖藻糖基轉移酶 EC2.4.1.68的催化結構域融合的、經密碼子優化用于巴斯德畢赤酵 母表達的釀酒酵母Mnn2的氨基酸1-36。