[發明專利]甘蔗細胞懸浮液制備方法

無效

• 申請號: 200810233740.4
• 申請日: 2008-12-22
• 公開（公告）號: CN101434932A
• 公開（公告）日: 2009-05-20
• 發明（設計）人: 趙培方;陳學寬;侯朝祥;劉新龍;催杰;吳才文;劉家勇;趙俊;楊坤
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院甘蔗研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳 左

1.一種甘蔗細胞懸浮液制備方法，其特征在于：以甘蔗新葉作為外植體，采用三次固體培養基培養，取外植體接種于第一種培養基，在暗環境、溫度28～30℃下培養15～20天，得到第一次由外植體分化的愈傷組織，將該愈傷組織繼代培養，接種于第二種培養基中，在自然光、室溫下培養25～30天，再將第二次得到的愈傷組織繼代培養，接種于第三種培養基中自然光室溫下培養25～30天，得到顆粒狀甘蔗愈傷組織；顆粒狀甘蔗愈傷組織接種到包含1mg/L2.4-D和30g/L蔗糖的N₆液體培養基中，在轉速為120rpm/min、溫度為28℃的搖床上振蕩培養12天后，將培養液中的懸浮液轉接到離心管中，在轉速為5000rpm的轉速下離心20分鐘，去除上清液；留下的離心沉積物轉接到包含1mg/L2.4-D和30g/L蔗糖的N₆液體培養基中，在轉速為120rpm/min、溫度為28℃的搖床上振蕩培養48小時，即可得到分散均勻的甘蔗細胞懸浮液。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述三次固體培養基培養時，第一次采用的固體培養基為N₆+3mg/L的2.4-D+7g/L的瓊脂+30g/L的蔗糖+0.5g/L的活性碳；第二次和第三次采用的固體培養基為N₆+2mg/L的2.4-D+7g/L的瓊脂+30g/L的蔗糖。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的外植體選擇自甘蔗莖尖生長點2～3厘米長的新葉，經過75％酒精消毒處理后，切割為2～3毫米長作為外植體。