[發明專利]漆酶誘導物和其在提高微生物產漆酶能力中的應用

無效

• 申請號: 200810233650.5
• 申請日: 2008-11-28
• 公開（公告）號: CN101407794A
• 公開（公告）日: 2009-04-15
• 發明（設計）人: 魏云林;吳麗潔;林連兵;季秀玲;井申榮
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 賽曉剛

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地，涉及漆酶誘導物，及其在提高微生物產漆 酶能力中的應用。

背景技術

白腐真菌是自然界最重要的木素降解菌，其產生和分泌一系列能降解木質素及 其異生物質的酶類，它們主要包括木素過氧化物酶，錳過氧化物酶和漆酶。漆酶主 要是由引起木材白色腐朽的擔子菌分泌，是重要的木素降解酶，屬于含銅的一類多 酚氧化酶，它可以通過分子氧使酚化合物氧化，脫除木材、紙漿中的木素，使紙漿 和造紙工業中的流出物脫色和降解，能顯著減少排放到環境中的有毒污染物。

據報道，酚類底物、乙醇和某些金屬離子對漆酶的產生和分泌有誘導作用。酚 類底物通常都含較多的-OH，-NH₂，木質素是由香豆醇、松柏醇及芥子醇等苯丙烷單體 構成的聚合體作為底物類似物，可以在一定的程度上誘導漆酶的產生。醇類對漆酶 的產生也有一定的誘導作用，乙醇的誘導機制主要分為以下三點(i)增加了膜的 滲透性，促進蛋白的分泌；(ii)防止單個芳香化合物聚合；(iii)通過氧化作用間 接誘導漆酶的合成。金屬離子的誘導作用有很多報道，其中CuSO₄是使用最多、誘導 最好的重金屬誘導劑，Cu²⁺的加入從兩方面提高了漆酶的活性，促進了漆酶的合成， 增強了漆酶在細胞外環境中的穩定性。

根據國內外文獻報道，不同的培養條件對漆酶活力有顯著的影響。試驗表明， 靜止培養有利于XG8菌株產酶，這可能與有些白腐真菌分泌的漆酶對振蕩產生的機械 剪切力敏感有關，可見振蕩培養并不適合部分白腐真菌漆酶的產生。

迄今，現有技術中沒有利用蔗渣、乙醇及CuSO₄溶液組合成的漆酶誘導物的報道。

發明內容

本發明旨在為白腐菌產漆酶開發新型誘導物提供一種新的配方。此外利用蔗渣 誘導漆酶的產生將有利于漆酶降解蔗渣中所含大量木素分子，從而將被木素分子粘 連的蔗渣纖維相互分離，實現蔗渣的脫木素處理，對蔗渣造紙工業有重要應用價值。 為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：

漆酶誘導物，包含蔗渣、乙醇及硫酸銅溶液。

漆酶誘導物，在100ml液體培養基中誘導物成分為：蔗渣干重： 10-15g.L^-1，CuSO₄：5-50mg.L^-1，乙醇：20-50g.L^-1。

漆酶誘導物，在100ml液體培養基中誘導物成分為：蔗渣干重： 10-15g.L^-1，CuSO₄：20-30mg.L^-1，乙醇：40-50g.L^-1。

漆酶誘導物用于提高微生物產漆酶能力。

漆酶誘導物用于微生物產漆酶能力的培養方法：

(1)種子培養物的制備：

將微生物菌株菌苔接種到葡萄糖液體培養基中，于25℃靜止培養10天收獲菌 體，將菌體斷裂，作為種子培養物；

(2)菌株的誘導培養：

將種子培養物接種液體基礎培養基中，靜止培養，培養4天后添加漆酶誘導物 到培養液中，進行誘導培養15天檢測并提取漆酶。

所述的方法中，種子培養基組成為：MgSO₄·7H₂O，0.5g，NaCl0.5g，KH₂PO₄1.0g，NH₄SO₄1.0g，酵母粉1.0g，葡萄糖15g，加水定容至1升，調pH5～6。

誘導物的配制和采用：

CuSO₄溶液：配制1g.L^-1的CuSO₄原始溶液，115℃滅菌20min；分別向100ml 的培養液中加入1g.L^-1的CuSO₄溶液，使培養液中CuSO₄終濃度為5-50mg.L^-1；

乙醇溶液：無水乙醇用0.2μm的濾膜過濾除菌；分別向100ml的培養液中加 入2.5ml，3.875ml，5.375ml，6.25ml無水乙醇，使培養液中乙醇終濃度為乙醇： 20-50g.L^-1；