[發明專利]沙雷氏菌WJ39菌株,由其獲得的低溫蛋白酶及其純化方法

無效

• 申請號: 200810233627.6
• 申請日: 2008-11-24
• 公開（公告）號: CN101412981A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 魏云林;陸小波;季秀玲;井申榮;林連兵
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/52;C12R1/425
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 賽曉剛

1.低溫蛋白酶的純化方法，以沙雷氏菌(Serratia?sp.)WJ39菌株，菌種保藏號為GGMCC?No.2638為原料，其步驟包括：

(1)、制備粗酶液：沙雷氏菌(Serratia?sp.)WJ39菌株的發酵培養條件為溫度13℃，pH7.2，培養時間48小時，將發酵液離心，取上清即為粗酶液；

(2)、硫酸銨沉淀：粗酶液加硫酸銨至30-40％飽和度，離心取上清，繼續加硫酸銨至60-70％飽和度，離心棄上清，沉淀在50mM磷酸鹽緩沖液，pH8.0中透析過夜；

(3)、DEAE?Sepharose^TMFF陰離子交換層析：將透析的酶液離心棄雜質，上清進行濃縮，上樣于用50mM，pH7.0-8.0的磷酸鹽緩沖液預平衡過的DEAE?Sepharose^TM?FF陰離子交換層析柱，流速為0.4ml/min，NaCl濃度梯度為0.05mol/L、0.18mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L和1.0mol/L洗脫，收集洗脫峰，檢測蛋白濃度及酶活性部分，用10KDa的濃縮管于4℃離心收集濃縮液透析過夜，即為純酶，冷凍保存；將濃縮的樣品進行SDS-PAGE電泳分析，分離膠濃度為12.5％，濃縮膠濃度為5％，得到單一條帶，表明純化的低溫蛋白酶已經達到電泳純，分子量為47.6KDa。