[發明專利]卵巢功能相關蛋白及其制備方法和用途無效

申請號：	200810233208.2	申請日：	2008-12-03
公開（公告）號：	CN101481414A	公開（公告）日：	2009-07-15
發明（設計）人：	何畏;吳玉章;李彥鋒;龍玲;向云龍	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第三軍醫大學
主分類號：	C07K14/47	分類號：	C07K14/47;C12N15/12;C12N15/63;C07K16/18;G01N33/53;C12Q1/68;A61K38/17;A61P15/08
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摘要：
搜索關鍵詞：	卵巢功能相關蛋白及其制備方法用途
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種蛋白質，特別涉及一種卵巢功能相關蛋白，還涉及該蛋白的制備方法和用途。

背景技術

卵細胞(又稱卵子)是一種特殊、高度分化的細胞。它具有滿足它獨特功能的細胞器，并能經歷一系列發育階段直至獲得與受精相匹配的細胞型。在人類胚胎時期，原生殖細胞(PGCs)經有絲分裂完成卵原細胞增殖，增殖后的卵原細胞(稱為初級卵母細胞)進入第一次減數分裂的前期，出生后仍休止在這個時期，以后在性腺未分化細胞的各種信號刺激下，初級卵母細胞生長、分化直至成熟為卵細胞。在這期間，卵細胞需要合成大量獨特的蛋白質為受精作準備。因此，對卵細胞特異性基因產物的表達、調控及其相互作用機制的研究一直是生殖領域的重要課題，對于揭示卵子發生、成熟、受精以及早期胚胎發育的機制均有重要意義，在卵巢早衰、排卵功能障礙、不孕等相關疾病的診斷和治療領域具有重要價值。

哺乳動物卵及早期胚胎發育的分子機制至今未能明確。卵母細胞減數分裂的特征是存在減數第二次分裂(M?II期)阻滯且沒有分裂間期。1978年，Dekel等提出濾泡細胞的環磷酸腺苷(cAMP)經縫隙連接流向卵細胞抑制減數分裂，黃體生成素(LH)可阻斷此通路。近年來，隨著對cAMP信號通路，減數分裂抑制狀態的維持和減數分裂復蘇等相關研究的日益深入，一些較系統的學說逐步形成：(1)蛋白激酶A(PKA)介導的cAMP抑制作用可能在兩個水平上發揮：對細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)p34cdc2持久的磷酸化和抑制細胞周期蛋白B(cyclin?B)的合成；在LH刺激下，卵細胞內cAMP濃度下降，M期啟動因子(MPF)被cdc25B磷酸酶激活，從而啟動減數分裂；(2)分裂中期的激活由分裂中期啟動復合物/周期素(APC/C)啟動，APC/C為泛素連接酶，有至少兩種底物(cyclinB和securin)，底物泛素化后可迅速被26S蛋白酶體水解；由于MPF是由催化亞基p34cdc2和調節亞基cyclin?B構成，因此，APC/C的啟動將導致MPF滅活，使細胞維持在分裂中期；(3)受精時，大量鈣離子內流可在三個環節發揮作用：阻斷cyclin?B和securin的合成、激活APC/C以及調控26S蛋白酶體，卵子減數第二次分裂的抑制狀態直到這時才解除；(4)MPF的活性還能刺激mos基因的多聚腺苷酸化，導致mos基因合成和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化。然而有證據表明：(1)在mos基因敲除的小鼠卵細胞內沒有發現MAKP在MPF活化中發揮作用；(2)抑制大鼠體內MAPK的作用不能阻止MPF的活化，減數分裂仍可被啟動；(3)對蛙卵的研究中發現了不依賴MAKP的MPF活化現象。因此，這一領域的學說仍相當不完善，面臨激烈的爭論，推測卵細胞內可能還存在未知的APC/C底物。

卵巢包含了人類生命延續的基因庫，其功能的正常發揮對物種的遺傳和延續有至關重要的作用。在卵巢的特異性基因產物中，參與卵泡成熟和胚胎發育過程者尤其重要，它的調控異常可能導致卵巢早衰、排卵功能障礙、不孕，甚至腫瘤等多種疾病。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種如下(a)或(b)的卵巢功能相關蛋白：

(a)由SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且與(a)限定的蛋白質具有相同或相似活性的由(a)衍生的蛋白質。

本發明的目的之二在于提供編碼所述卵巢功能相關蛋白的基因。

進一步，所述基因具有SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列；

進一步，所述基因在嚴格條件下可與SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列雜交。

本發明的目的之三在于提供含有所述基因的重組表達載體。

本發明的目的之四在于提供含有所述重組表達載體的轉化體。

本發明的目的之五在于提供制備所述卵巢功能相關蛋白的方法，包括以下步驟：

(a)轉化體的培養