[發(fā)明專利]基于模擬人血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF表位的疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810232718.8
• 申請日: 2008-12-11
• 公開（公告）號: CN101429234A
• 公開（公告）日: 2009-05-13
• 發(fā)明（設計）人: 張英起;冉永剛;韓葦
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C40B30/04;G01N33/577;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 張震國

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術領域，具體涉及一種基于模擬人血管內(nèi)皮細胞生長 因子VEGF的模擬表位及用該模擬表位構建的在體內(nèi)能夠誘導出針對VEGF分子自 身抗體的多肽表位疫苗及其制備方法。

背景技術

1、VEGF分子及其單克隆抗體的相關研究

1.1VEGF分子

VEGF相對分子量為34-42KD，是由分子量為17-22KD的同源二聚體通過二 硫鍵聯(lián)接而成。人類VEGF的基因結構位于染色體的6p21.3，該基因全長為28kb， 編碼VEGF的基因長約1.4萬個堿基對，由8個外顯子和7個內(nèi)含子交替構成。 由于VEGF?mRNA的不同剪切方式可使其有5種VEGF異構體。根據(jù)氨基酸的 大小命名為V?EGF206(包含所有外顯子及部分第7個內(nèi)含子)、VEGF189(包 含8個外顯子)、VEGF165(缺少外顯子6)、VEGF145(缺少外顯子7)及VEGF121 (缺少外顯子6和7)，體內(nèi)以VEGF165較為常見。5種VEGF的異構體都具有 誘導內(nèi)皮細胞增生的相對活性，其功能上的差異主要在于它們與細胞表面和細胞 外基質中肝素的親和力不同。

VEGF分子通過與血管內(nèi)皮細胞表面特異性受體結合發(fā)揮生物學效應。其主 要的生物學功能是促進內(nèi)皮細胞增殖、促進血管生長和增加血管通透性?，F(xiàn)已證 明，VEGF與受體結合后可以迅速增加細胞內(nèi)Ca²⁺水平，通過磷酸肌醇特異性磷 酸脂酶C途徑，使細胞內(nèi)IP₃水平升高，傳導細胞內(nèi)信號，最終完成生物學效應。

1.2VEGF單克隆抗體的發(fā)展現(xiàn)狀

過去的大約30年中，由和Milstein提出的單克隆抗體技術已經(jīng)為一系 列疾病的的體外診斷提供了契機。然而，單克隆抗體的特異性識別抗原的特性在 人類疾病的免疫治療只是在近10年中才嶄露頭角。目前，單克隆抗體(mAbs) 在臨床中被用于癌癥的診斷和治療，控制自體免疫性疾病、移植物抗宿主反應和 同種異體移植排斥，以及治療細菌感染引發(fā)的腦(脊)髓炎、心肌損傷和可逆的 藥物中毒等。

VEGF是促進腫瘤血管生長作用最強的分子之一，多種腫瘤都高分泌該分子； 因此該分子成為抗血管生成治療腫瘤方法中的重要靶標。阿瓦斯汀(Avastin)是 一種人源化抗VEGF單克隆抗體，可與人VEGF結合，阻斷VEGF與受體結合后 介導的下游信號通路，從而抑制人VEGF的生物學活性，包括抑制內(nèi)皮細胞促有 絲分裂活性、血管通透性增加活性和促血管生成活性，達到抗腫瘤目的。

Avastin是第一個被FDA批準用于抗腫瘤血管生成治療的單克隆抗體制劑， 2004年由FDA批準用于結直腸癌及非小細胞肺癌的治療，它的出現(xiàn)為抗腫瘤血管 生成療法開創(chuàng)了新天地。Avastin優(yōu)勢有：其作用靶點直接暴露于血液中，便于藥 物直接作用；靶點基因表達穩(wěn)定，不易產(chǎn)生抗藥性；無需考慮腫瘤組織學特性； 可抑制腫瘤轉移；有下游放大效應；不良反應相對小。Avastin與放、化療聯(lián)合具 有協(xié)同作用：(1)可使腫瘤區(qū)血管生成正?；M織間高壓減輕，利于化療藥向 腫瘤區(qū)輸送；(2)放、化療所致局部腫瘤區(qū)缺氧可促VEGF表達，幫助腫瘤細胞 抵抗放、化療的凋亡誘導機制，而聯(lián)用Avastin將預防這種繼發(fā)的保護效應，使治 療反應增敏。

Avastin不良反應主要是出血和胃腸穿孔，另外還有虛弱、疼痛、高血壓、腹 瀉、白細胞減少、腹痛、頭痛、惡心、嘔吐、食欲缺乏、口腔炎、深部靜脈血栓 形成、腹內(nèi)血栓、便秘、上呼吸道感染、剝脫性皮炎、呼吸困難、蛋白尿等。罕 見的嚴重不良反應有腸梗阻、腸壞死、腸系膜靜脈閉賽、吻合處潰瘍、低鈉血癥 等。Avastin用藥量375mg/m²，每周1次靜脈滴注共4次為1療程，平均1療程費 用為10萬人民幣左右，花費高昂。

2、噬菌體表面隨機呈現(xiàn)肽庫技術