[發(fā)明專利]一種豬鏈球菌2型三組分亞單位疫苗及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810225346.6
• 申請日: 2008-10-30
• 公開（公告）號: CN101412984A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金梅林;李冉;張安定;陳煥春;王雅;康超;陳博
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P21/00;A61K39/09;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張紅兵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及家畜傳染病疫苗制備技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種豬鏈球菌2型三組分亞單 位疫苗及其制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明涉及基于豬鏈球菌2型的三種抗原蛋白基因的克隆、表 達(dá)及功能驗(yàn)證和應(yīng)用。所述的基因表達(dá)的抗原蛋白能夠提高豬抵抗豬鏈球菌2型的能力。

背景技術(shù)

豬鏈球菌(Streptococcus?suis，S.suis)是引起豬鏈球菌病的主要病原，依據(jù)細(xì)菌表面 的莢膜多糖(CPS)可以將S.suis分為35個血清型，分別為1/2型和1～34型，但最近也有 人提出32型和34型應(yīng)該歸于streptococcus?orisratti，而不應(yīng)該歸于豬鏈球菌，其中豬鏈球 菌2型是毒力最強(qiáng)、其中豬鏈球菌2型(SS2)致病性強(qiáng)、流行廣，該型亦是臨床分離頻率 最高的血清型。SS2是一種重要的人畜共患病病原體，能引起豬腦膜炎(meningitis)、心內(nèi) 膜炎(endocarditi)、敗血癥(septicemia)、關(guān)節(jié)炎(arthritis)、漿膜炎(polyserositis)、 肺炎(pneumonia)等，常引起斷奶仔豬或育肥豬突然死亡；人類感染該菌，可導(dǎo)致腦膜炎， 引發(fā)永久性耳聾、敗血癥、心內(nèi)膜炎，甚至死亡。1991年首次報道在廣東省發(fā)現(xiàn)豬2型鏈 球菌疑似病例，1998-1999年江蘇省部分地區(qū)連續(xù)2年在盛夏季節(jié)暴發(fā)該病。目前已有足 夠的流行病學(xué)資料證實(shí)，SS2已經(jīng)對我國的養(yǎng)殖業(yè)和人民健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。

由于缺乏豬鏈球菌病的流行病學(xué)資料，致病機(jī)理不清，無有效的疫苗和敏感的診斷方法， 在很多國家豬鏈球菌病一直未能得到有效地控制。

盡管對豬鏈球菌2型的致病機(jī)理目前仍處在研究和發(fā)現(xiàn)階段，影響了豬鏈球菌2型疫苗 研究的順利進(jìn)行，但該疫苗的研究仍取得了一定的進(jìn)展。目前研究的豬鏈球菌2型疫苗主要 有滅活疫苗、活疫苗、基因工程活載體疫苗和亞單位苗，但在實(shí)際應(yīng)用中各有不足之處。滅 活疫苗對同源的豬鏈球菌具有較好的免疫保護(hù)，但由于不同菌株的毒力基因表性存在較大差 異，對于異源菌株的保護(hù)力不佳；活疫苗可使豬得到保護(hù)，但不能清除定居在扁桃體或關(guān)節(jié)里 的2型豬鏈球菌，也不能清除隱性感染豬扁桃體內(nèi)的細(xì)菌；活載體疫苗主要是當(dāng)今與未來疫苗 研制與開發(fā)的主要方向之一，疫苗兼有常規(guī)活菌苗和滅活菌苗的優(yōu)點(diǎn)，但是按照美國食品與 藥物管理局(Food?and?drug?administ?ration，F(xiàn)DA)的規(guī)定，活疫苗中不能存在抗藥質(zhì)粒， 并且在人和動物體內(nèi)，無法用抗生素來維持重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性；亞單位苗具有活菌苗的免疫效 力高、及滅活菌苗的安全性好等優(yōu)點(diǎn)，但是，亞單位苗的抗原成分單一，對其他血清型的保護(hù)作 用有限。范紅結(jié)等研制的鏈球菌重組亞單位疫苗能對馬鏈球菌獸疫亞種和豬鏈球菌2型提供 較好的保護(hù)，但目前國內(nèi)豬鏈球菌病病原以豬鏈球菌2型為主，其它型豬鏈球菌也占了一定 比例，而馬鏈球菌獸疫亞種比例則越來越小。因此，預(yù)防豬鏈球菌2型和其它型豬鏈球菌越 來越重要。

鑒于此，本發(fā)明著手于豬鏈球菌2型新型免疫保護(hù)性抗原的研究，尋找?guī)追N免疫保護(hù)效 果好，并且在豬鏈球菌2型以外的其它豬鏈球菌血清型中廣泛存在的免疫原性蛋白，進(jìn)而組 合成有效的豬鏈球菌亞單位疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是獲得具有很好適用于豬鏈球菌2型的免疫原性蛋白，通過對編碼該基因 的序列的克隆、表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證其功能，并制備一種能抵抗豬鏈球菌2型的三組分亞單位 疫苗。

解決本發(fā)明的核心技術(shù)方案是：克隆報道的HP0197、HP1036和Enolase基因；通過 大腸桿菌表達(dá)，制備對豬鏈球菌2型有免疫原性的抗原蛋白，進(jìn)而制備一種豬鏈球菌2型亞 單位疫苗。另外，本發(fā)明還包括所述重組大腸桿菌及其分泌的抗原蛋白在制備豬鏈球菌2型 亞單位疫苗中的用途。

本發(fā)明將報道的HP0197、HP1036和Enolase基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌BL21中，分泌該抗 原蛋白的大腸桿菌已于2008年10月9日送交湖北省武漢市武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保 藏中心(CCTCC)保藏。具體保藏信息如下：

1、大腸桿菌(Escherichia?coli)BL21/pET-28a-0197，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中 心(CCTCC)，保藏編號為CCTCC?NO：M208146。