[發明專利]一種酸性木聚糖酶XYNB及其基因和應用

無效

• 申請號: 200810223742.5
• 申請日: 2008-10-10
• 公開（公告）號: CN101724565A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 史寶軍;胡愛紅;羅長財
• 申請（專利權）人: 廣東溢多利生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/645
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 楊小蓉

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種產酸性木聚糖酶的菌株Bispora?sp.X-1，和從該菌種中得到的酸性木聚糖酶及其基因、包含該基因的重組載體和應用。

背景技術

半纖維素是自然界中含量僅次于纖維素的第二豐富的多聚糖，幾乎占地球可更新有機碳含量的三分之一(Prade.Biotech.and?Gentic?Engi.Rev..13(12)：101～131，1995)。木聚糖是主要類型的半纖維素(Collins?et?al..FEMS?Microbiol?Rev.29：3～23.2005)，廣泛存在于在農業副產物如玉米芯、麥麩、米糠、秸稈、甘蔗渣等中，但這一重要的可再生資源一直難以得到有效的利用。木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚糖和木糖的一類酶的總稱，對木聚糖酶的研究早在六十年代就已開始，主要研究集中在適合于食品工業、制漿造紙工業、能源工業等方面的木聚糖酶。

許多微生物包括細菌、真菌和酵母菌都能產木聚糖酶。大多數木聚糖酶屬第F/10、G/11族糖基水解酶，不同來源的木聚糖酶其氨基酸序列、空間結構、相對分子質量、等電點以及底物特異性各不相同，因而有必要對編碼各種木聚糖酶的基因進行克隆和表達，以滿足工業應用的需求。目前，已有許多種木聚糖酶編碼基因得到分離，在木聚糖酶基因的高效表達方面也進行了較多嘗試(張紅蓮等，科學通報，48(4)：364～368，2003；Zhou?et?al..Bioresource?Technology.831-838，2008；Li?et?al.，Appl.Microbiol.Biotechol..inpress，2008)。

近年來，從極端微生物中分離木聚糖酶引起了人們的極大的興趣。這些木聚糖酶由于適應極端環境而獲得了特殊的性質，可以滿足工業應用的特殊需求。如來源于Thermotoga?sp.嗜熱木聚糖酶(Simpson?et?al.Biochem?J.277：413-417.1991)；來源于嗜堿菌Bacillus?sp.strain?41M-1嗜堿木聚糖酶(Nakamura?et?al.，ApplEnviron?Microbiol.59：2311-2316.1998)；來源于Penicillium?sp.40嗜酸性木聚糖酶(Kimura?et?al.Biosci?Biotechnol?Biochem.64：1230-1237.2000)等。

但迄今為止，關于酸性木聚糖酶的報道卻不多。由于酸性木聚糖酶在pH值4.0以下時仍然保持較高酶活性，通常酸性木聚糖酶可以廣泛應用于飼料工業、釀酒工業、食品工業等眾多領域，充分顯示出它在生產上的巨大潛力。目前，同時具備耐酸、耐高溫、抗蛋白穩定性等性質并運用基因工程手段來產業化生產嗜酸木聚糖酶產品還未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種產酸性木聚糖酶的菌株Bispora?sp.X-1。

本發明的再一目的是提供來源于上述菌株的酸性木聚糖酶。

本發明的再一目的是提供上述木聚糖酶的基因。

本發明的再一目的是提供包含上述木聚糖酶基因的重組載體。

本發明的再一目的是提供包含上述木聚糖酶基因的重組菌株。

本發明的再一目的是提供一種制備酸性木聚糖酶的方法。

本發明的再一目的是提供上述酸性木聚糖酶的應用。

本發明首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性質優良的、適合于在飼料、食品、釀酒以及能源工業中應用新的木聚糖酶。本發明人篩選到一種天然菌株，它所產生的木聚糖酶適合于在飼料、食品、釀酒以及能源工業中使用。該嗜酸真菌Bispora?sp.X-1，于2008年9月26日、保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，100101)其保藏號為CGMCC?No.2676。

從上述菌株中獲得了一種酸性木聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1：

??1??MHAFSYLAVA?LSALPLLQAA?PTSVQKRGAH?NFMLSPDHPL

?????MVAKRNASLA

?51??RRSSTNYDQD?YTTGGSVYFA?PASGEFYVSW?DTTDDFVVGV

?????GWNPGSTEPI

101??THGGSFNVDS?GLASLSVYGW?STNPLVEYYI?IDDEVDLPLS

?????GTEKGTVYSD