[發明專利]血清HSP27在制備原發性肝細胞癌診斷試劑盒中的應用

無效

• 申請號: 200810220190.2
• 申請日: 2008-12-19
• 公開（公告）號: CN101514989A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發明（設計）人: 謝丹;孔祥復;朱蕭;陳敏山;李東培;王毅;武鴻美;廖奕佶;鄧海霞
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司
• 代理人: 劉孟斌

[技術領域]

本發明涉及一種癌癥診斷技術，特別是血清HSP27在原發性肝細胞癌診斷試劑盒制備中的應用。

[背景技術]

肝細胞肝癌(Hepatocellular?carcinoma，HCC)是一個在東亞和南亞地區高發的惡性腫瘤，其發病率在全世界范圍內位居第五，而且在腫瘤致死率中位于第三，每年大概有25萬到100萬人會得肝癌，每年因為肝癌而死亡的人口在20萬左右。目前，肝細胞癌的高發病率、高死亡率及其逐年增高的趨勢，已成為一個極其嚴重的國際衛生問題。造成肝癌發病的原因很復雜，從環境影響和生活習慣角度說，攝入了黃曲霉污染的食物、酗酒、以及乙型、丙型肝炎病毒的感染等等都會提高肝癌發生的可能性。從1990年開始，HCC在中國的腫瘤致死原因中高居第二，乙肝病毒被認為是最主要的風險因子。肝細胞癌也是中國華南地區常見惡性腫瘤之一，尋找HCC的早期血清學診斷標志物，對于肝癌的預防和早期治療均具有重要意義。

AFP是胚胎發育早期的一種主要血清蛋白，肝細胞癌患者血清AFP含量升高，但有部分患者AFP在正常范圍內。原發性肝細胞癌迄今為止尚缺乏早期準確預測，主要問題是：(1)AFP陰性肝癌的早期診斷；(2)伴有肝病活動的AFP陽性肝癌與伴有AFP升高的慢性肝病相鑒別；及(3)微小肝癌的早期診斷。長期以來，AFP作為原發性肝癌的診斷指標，為臨床作出了重大的貢獻，對肝癌診斷的重要意義已得到臨床肯定。特別是AFP異質體(AFP-Variant)檢測與肝癌發生的關系，對于肝癌的早期診斷有較高的應用價值。但是，AFP的敏感性是有限的；特別是近年來，AFP陰性的HCC患者有上升趨勢。本研究中，肝癌組患者AFP單項的敏感性為60.53％、特異性82.09％，陽性預測值是79.31％，僅憑AFP診斷肝癌易造成漏診和誤診，單項AFP診斷肝癌不夠理想。因此，尋找AFP之外的腫瘤早期標志物是當務之急。

[發明內容]

熱休克蛋白27(HSP27)作為熱休克蛋白家族中的低分子蛋白，廣泛表達于各種組織細胞中。研究發現，HSP27除作為分子伴侶保護細胞外，還通過調節細胞生長分化、抑制細胞凋亡。高度表達HSP27的細胞，其發生多種腫瘤，如乳腺癌、前列腺癌、神經母細胞瘤、卵巢癌及消化系腫瘤等的危險性大大增高，且與腫瘤的侵襲轉移過程、惡性程度及TNM分期及預后有關，HSP27可作為腫瘤預后好壞的可信指標之一。

通過檢測正常人、乙肝病毒攜帶者和HCC患者血清中HSP27的含量，通過統計學分析，根據HSP27含量與HCC的相關性，并且結合血清AFP的平行檢測，希望為原發性肝細胞癌的臨床血清學早期診斷找到新的生物標記物。

本發明公開了一種原發性肝細胞癌診斷試劑盒及其制備方法與應用，該試劑盒可以快速、準確地進行HSP27的檢測，從而可以對各期(特別是早期)原發性肝細胞癌作出快速的輔助診斷，具有重要的臨床應用價值。本發明包括建立了基于雙抗體夾心原理的酶聯免疫診斷系統。由于血清不用稀釋，因此靈敏度大大提高。本發明有益的積極效果是：檢測試劑盒操作簡單、試劑穩定、重復性好、特異性強、敏感性高、操作簡單，易于大范圍推廣應用，具有廣闊的市場前景。

[附圖說明]

圖1是正常人組、HBV感染組、肝癌組患者血清HSP27值誤差條形圖。1.正常人組，2.HBV感染組，3.肝細胞癌組，P(2:1)＞0.05；P(3:1)＜0.01；P(3:1+2)＜0.01。

圖2是正常人、慢性HBV感染、急性HBV感染、小肝癌、中等大肝癌和大肝癌患者血清HSP27值誤差條形圖。1.正常人HBV組，2.慢性HBV組，3.急性HBV組，4.小肝癌，5.中等大肝癌，6.大肝癌；P(2:1)＞0.05；P(3:1)＞0.05；P(4:1)＜0.05；P(5:1)＜0.01；P(6:1)＜0.01；P(3:2)＞0.05；P(4:2)＜0.05；P(5:2)＜0.01；P(6:2)＜0.01；P(4:3)＜0.05；P(5:3)＜0.01；P(6:3)＜0.01。

圖3是正常人組、HBV慢性感染組、HBV急性感染組、AFP陰性肝細胞癌組和AFP陽性肝細胞癌組患者血清HSP27值誤差條形圖，1.正常人組，2.HBV慢性感染組，3.HBV急性感染組，4.AFP≤25μg/L肝細胞癌組，5.AFP＞25μg/L肝細胞癌組.P(4:1)＜0.01；P(5∶1)＜0.01；P(5:2)＜0.01；P(4:3)＜0.01；P(5:3)＜0.01。