[發(fā)明專利]腺病毒轉(zhuǎn)染的初級細(xì)胞以及路徑圖譜繪制方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810215331.1
• 申請日: 2004-12-01
• 公開（公告）號: CN101353706A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓昌洙;李黎
• 申請（專利權(quán)）人: 安萬特藥物公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/66;C12Q1/02;C12N15/861;C12N5/10
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.一種確定刺激是否能夠激活免疫細(xì)胞中的候選順式作用調(diào)節(jié)元件 的方法，其中所述順式作用調(diào)節(jié)元件受至少一種轉(zhuǎn)錄因子或增強(qiáng)子的調(diào)節(jié)， 且其中所述刺激已知能夠調(diào)控信號傳遞路徑的表達(dá)，所述方法包括步驟：

(a)用重組腺病毒轉(zhuǎn)染所述免疫細(xì)胞，所述重組腺病毒含有有效地連 接于所述候選順式作用調(diào)節(jié)元件的報告基因；

(b)測量報告基因活性的基底水平；

(c)對所述免疫細(xì)胞施加所述刺激；和

(d)測量響應(yīng)所述刺激的報告基因的活性。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述刺激包括調(diào)控調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，并且 所述施加步驟(c)包括調(diào)控所述調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)。

3.權(quán)利要求2的方法，還包括用所述調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染所述 免疫細(xì)胞的步驟。

4.權(quán)利要求1的方法，其中所述施加步驟(c)包括引入候選調(diào)節(jié)化合 物。

5.權(quán)利要求1的方法，其中所述報告基因選自熒光素酶、綠色熒光 蛋白(“GFP”)、β-半乳糖激酶(“GAL”)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(“CAT”)。

6.權(quán)利要求1的方法，其中所述報告基因為抑制基因。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述抑制基因為IκBsd。

8.權(quán)利要求1的方法，其中所述順式作用調(diào)節(jié)元件受與炎癥相關(guān)的 調(diào)節(jié)蛋白調(diào)控。

9.權(quán)利要求1的方法，其中所述順式作用調(diào)節(jié)元件選自AP-1、CRE、 ISRE、NFAT、NFκB和SRE。

10.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫細(xì)胞選自巨噬細(xì)胞、CD4⁺T細(xì) 胞以及未成熟樹突細(xì)胞。

11.一種抑制免疫細(xì)胞中信號傳遞路徑表達(dá)的方法，包括步驟：

(a)用重組腺病毒轉(zhuǎn)染所述免疫細(xì)胞，其中所述重組腺病毒含有有效 地連接于順式作用調(diào)節(jié)元件的抑制基因，其中所述順式作用調(diào)節(jié)元件屬于 所述信號傳遞路徑；和

(b)誘導(dǎo)所述抑制基因表達(dá)。

12.權(quán)利要求11的方法，其中所述信號傳遞路徑為NFκB信號傳遞路 徑。

13.權(quán)利要求11的方法，其中所述抑制基因為IκBsd。

14.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫細(xì)胞選自巨噬細(xì)胞、CD4⁺T 細(xì)胞和未成熟樹突細(xì)胞。