[發(fā)明專利]一種定量分析人血漿維格列汀濃度的LC-MS/MS檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010584694.3 | 申請日： | 2020-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN111796035A | 公開（公告）日： | 2020-10-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 譚志榮;王醫(yī)成;彭靜波;饒?zhí)?/a>;陳堯;周宏灝;賀康 | 申請（專利權(quán)）人： | 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72 |
| 代理公司： | 長沙新裕知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 43210 | 代理人： | 劉加 |
| 地址： | 410008 湖*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 定量分析 血漿 維格列汀 濃度 lc ms 檢測 方法 | ||
1.一種定量分析人血漿維格列汀濃度的LC-MS/MS檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)樣品制備：
a.標(biāo)準(zhǔn)樣品制備：精密稱取維格列汀對照品10.68mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分別沖洗管壁和稱量紙殘余至容量瓶中，混勻溶解，再加入甲醇定容，顛倒混勻，配成濃度為1.068mg/ml的維格列汀標(biāo)準(zhǔn)儲備液A；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀釋配制維格列汀的標(biāo)曲工作溶液，濃度分別為：22.25ng/ml、44.5ng/ml、89.0ng/ml、178.0ng/ml、534.0ng/ml、1186.67ng/ml、3560.0ng/ml、10680.0ng/ml；
以人空白血漿作為空白基質(zhì)，加入維格列汀標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，配制8個已知的不同濃度的維格列汀標(biāo)準(zhǔn)樣品；
b.質(zhì)控樣品制備：精密稱取維格列汀對照品10.70mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分別沖洗管壁和稱量紙殘余至容量瓶中，混勻溶解，再加入甲醇定容，顛倒混勻，配成濃度為1.070mg/ml的維格列汀標(biāo)準(zhǔn)儲備液B；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀釋配制維格列汀的質(zhì)控工作溶液，濃度分別為：44.583ng/ml、535.0ng/ml、8560.0ng/ml；
以人血漿作為空白基質(zhì)，加入維格列汀標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制低、中、高三個已知濃度的維格列汀質(zhì)控樣品；
(2)樣品處理：包括待測人血漿樣品、標(biāo)準(zhǔn)樣品、質(zhì)控樣品，處理方法均如下：
取血漿樣品100μl至2ml EP管中，加入1.0ml含3.15ng/ml內(nèi)標(biāo)的沉淀劑乙腈，振蕩器上自動震蕩5min，15000r/min下離心10min后，吸取50μl上清液至另一干凈2ml EP管中，再加入300μl 5mM甲酸銨水溶液與乙腈混合液，所述甲酸銨水溶液與乙腈混合液的體積比為1：1，振蕩器上自動震蕩2min，15000r/min下離心5min后，轉(zhuǎn)移上清至進樣瓶；
(3)樣品檢測：步驟(2)獲得的樣品，取2μl自動進樣，進行高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測；
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作和定量分析：步驟(3)完成后，以維格列汀與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(Y)為縱坐標(biāo)，以維格列汀在血漿樣本中的濃度X為橫坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法權(quán)重因子l/X2進行線性回歸，制作到維格列汀的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，再通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量質(zhì)控樣本和待測人血漿樣本。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量分析人血漿維格列汀濃度的LC-MS/MS檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，維格列汀標(biāo)準(zhǔn)樣品系列濃度為1.113ng/ml、2.225ng/ml、4.45ng/ml、8.90ng/ml、26.70ng/ml、59.33ng/ml、178.0ng/ml、534.0ng/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的定量分析人血漿維格列汀濃度的LC-MS/MS檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，維格列汀質(zhì)控樣品低、中、高濃度分別為2.229ng/ml、26.75ng/ml、428.0ng/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量分析人血漿維格列汀濃度的LC-MS/MS檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，采用穩(wěn)定的同位素標(biāo)記物13C5-15N-維格列汀作為內(nèi)標(biāo)；其配制過程是：精密稱取同位素13C5-15N-維格列汀對照品3.15mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分別沖洗管壁和稱量紙殘余至容量瓶中，混勻溶解，再加入甲醇定容，顛倒混勻，配成濃度為0.315mg/ml的13C5-15N-維格列汀標(biāo)準(zhǔn)儲備液C；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀釋配制內(nèi)標(biāo)的工作溶液，最后使用的工作液則用乙腈稀釋配制。
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