[發(fā)明專利]無汞乙腦滅活疫苗組合物及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810203176.1
• 申請日: 2008-11-21
• 公開（公告）號: CN101732707A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 朱紹榮
• 申請（專利權）人: 上海榮盛生物藥業(yè)有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K47/42;A61P31/12
• 代理公司: 上海開祺知識產(chǎn)權代理有限公司 31114
• 代理人: 包文超;費開逵

技術領域

本發(fā)明涉及疫苗組合物，尤其涉及乙腦疫苗組合物，更具體的是涉及 一種無汞乙腦滅活疫苗組合物。

背景技術

自法國人巴斯德發(fā)明疫苗以來，人類在與傳染病的較量中，疫苗起到 了舉足輕重的作用，為提高人類的健康和社會的安定作出了重要的貢獻。

現(xiàn)行的疫苗主要分成減毒活疫苗和滅活疫苗兩大類。減毒活疫苗主要 包括水痘疫苗、麻風腮疫苗、甲肝疫苗和卡介苗等，滅活疫苗主要包括流 感疫苗、乙腦疫苗、狂犬疫苗、百白破疫苗、Hib疫苗和流腦疫苗等。

滅活疫苗在制劑時，傳統(tǒng)的方法是在疫苗的主要成分(如病毒和細菌 的重要抗原成分)中加入緩沖液或賦形劑。塞諾菲巴斯德生物制品有限公 司生產(chǎn)的巴斯德流感裂解疫苗使用磷酸緩沖鹽溶液為緩沖液(凡爾靈 國藥準字J20030029)，中國藥典三部記載的乙腦滅活疫苗 使用用Earle’s液為緩沖液(北京：化學工業(yè)出版社，2005年版，74-76)。 中國藥典三部記載了I型腎綜合征出血熱滅活疫苗(北京：化學工業(yè)出版 社，2005年版，80-82)和人用狂犬疫苗(北京：化學工業(yè)出版社，2005 年版，89-91)使用人血白蛋白為抗原保護劑，A型腦膜炎球菌多糖疫苗 中所使用的保護劑則為乳糖(中國藥典三部，北京：化學工業(yè)出版社，2005 年版，34-36)。這些現(xiàn)有疫苗大多以硫柳汞為防腐劑，如I型腎綜合征 出血熱滅活疫苗、人用狂犬疫苗和吸附百日咳白喉聯(lián)合疫苗(中國藥典三 部，北京：化學工業(yè)出版社，2005年版，80-82；89-91；54-57)。

先前的滅活疫苗在制劑和分裝時每瓶為多劑量，使用時需從一瓶中多 次吸取疫苗進行接種。為了防止因接種操作引起的污染，在滅活疫苗中加 入防腐劑(如硫柳汞)以降低疫苗受污染的幾率。

硫柳汞(thimerosal)可以有效地降低疫苗接種操作中引起的污染， 但由于其中含有汞(Hg)的成分，可能會造成使用者(特別是兒童)被 汞污染，引起不良反應。美國FDA在1999年的回顧中發(fā)現(xiàn)某些嬰兒疫苗 中的汞含量超過了聯(lián)邦標準。因此，1999年7月FDA給疫苗生產(chǎn)商發(fā)了 一封信，要求他們在疫苗中去除硫柳汞或說明繼續(xù)使用該防腐劑的原因。 這一行動取得了效果，在嬰兒疫苗中汞的含量下降了60％。

目前，部分單劑量的滅活疫苗已不含或含低硫柳汞(應不高于50μg/ 劑)，如流感疫苗(凡爾靈塞諾菲巴斯德生物制品有限公 司，國藥準字J20030029)等。但目前國內(nèi)外的乙腦滅活疫苗如國產(chǎn)乙型 腦炎滅活疫苗(中國藥典三部，北京：化學工業(yè)出版社，2005年版：74-76)、 日本產(chǎn)日本腦炎滅活疫苗(BIKEN日本大阪大學觀音寺研究所 生產(chǎn)的乙腦滅活疫苗說明書)、及臺灣國光日本腦炎疫苗 (http://www.adimmune.com.tw/product.asp？p_id＝20051028929351YQ4XR)均 含有硫柳汞，至今尚未有關乙腦滅活疫苗不含硫柳汞的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的在于提供一種無汞乙腦滅活疫苗組合物。在疫苗原 液中添加無酚紅199培養(yǎng)液和病毒保護劑制備該組合物。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種無汞乙腦滅活疫苗組合物的用途， 該組合物用于無汞乙腦滅活疫苗的制備。

病毒保護劑具體為人血白蛋白或重組人血白蛋白。

本發(fā)明所述的無汞乙腦滅活疫苗組合物的制備步驟如下：

1、Vero細胞培育

從工作細胞庫中取出細胞接種于細胞培養(yǎng)液中進行復蘇，具體為含 2.5—20％(v/v)小牛血清的199培養(yǎng)液。復蘇的細胞長成單細胞層后， 采用0.1—0.8％(w/v)胰蛋白酶消化傳代，細胞以1∶2—1∶8比例傳代， 培養(yǎng)時間為2—7天，培養(yǎng)溫度37±1℃；

2、接種乙腦病毒

挑選細胞生長良好的培養(yǎng)瓶，用PBS?pH7.2緩沖液充分淋洗細胞后加 病毒維持液，具體為含1—10％(v/v)20％人血白蛋白的199培養(yǎng)液，接 種乙腦病毒，MOI為0.01-0.001；

3、乙腦病毒培養(yǎng)

將接種病毒的細胞置34±1℃培養(yǎng)2—7天。

4、收獲乙腦病毒

選擇有典型細胞病變和肉眼檢查無污染的培養(yǎng)瓶，收獲病毒液。收 獲的病毒液經(jīng)澄清合并，制成病毒收獲液。

5、乙腦病毒滅活