[發明專利]一種新的基于腺病毒復制重組的腫瘤靶向基因治療系統

無效

• 申請號: 200810200511.2
• 申請日: 2008-09-26
• 公開（公告）號: CN101684477A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發明（設計）人: 梁旻;陸琴
• 申請（專利權）人: 上海三維生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明與基因治療領域相關，具體地講，本發明涉及一套高效低毒的基因轉移載體；其是具有特定結構的重組和/或經修飾的腺病毒載體。作為靶向目的細胞的基因轉移的載體，并利用其在宿主細胞中的復制重組產生子代腺病毒，表達所攜帶外源基因，達到基因治療，特別是各種癌癥的基因治療的目的。

背景技術

目前作為基因治療的常見載體有逆轉錄病毒載體，腺病毒載體和腺相關病毒載體，其中作為腫瘤基因治療較為常用的是腺病毒載體。

腺病毒是一種雙鏈DNA病毒，其基因長度約為36kb，分為早期轉錄區和晚期轉錄區，目前的研究發現，人腺病毒有47個血清型，分屬A-F6個亞屬，其中C亞屬的5型腺病毒是目前人們研究最為詳細的一種。

將腺病毒刪除E1區和E3區所得到的腺病毒載體常被稱為第一代腺病毒載體，這種載體可以插入并表達長度約為8kb以內的外源基因，這種腺病毒載體本身不能復制產生子代病毒，腺病毒載體DNA也不整合進入宿主基因組中。

對于惡性腫瘤的基因治療，要求病毒載體可以高效靶向地進入腫瘤細胞，表達治療基因或靶向性地在腫瘤細胞內復制，進而殺死腫瘤細胞。腺病毒載體能感染多種腫瘤細胞，包括靜止期細胞，腺病毒載體可以較為容易的大規模培養并獲得高滴度的病毒純品。這些特點使得腺病毒作為常用的腫瘤基因治療載體。腺病毒作為腫瘤基因治療的載體，提高其對腫瘤細胞的感染效率和靶向性是十分必要的。目前主要通過轉導水平調控、轉錄水平調控、翻譯水平調控等途徑來進行。

基于轉導水平調控的腫瘤靶向腺病毒載體。多數腫瘤細胞表面腺病毒受體(CAR)表達不足(Jee.YS，et.al.Anticancer?Res.2002，22：2629-34)，因而降低了2型或5型腺病毒載體的轉導效率。為了提高轉導效率而改變腺病毒外殼蛋白的結構(如鞭毛修飾型AdF35載體(Shayakhmetov?DM.et.al.J.Virol.2000，74：2567-83))，使得腺病毒通過結合腫瘤細胞表面高表達的受體，如CD46膜蛋白(Gaggar?A.et.al.Nat.Med.2003，9：1408-12)進入細胞，改善其轉導效率。

基于轉錄水平的調控主要應用外源的腫瘤特異性啟動子重組腺病毒腫瘤靶向復制表達(Ye?X.et.al.Biochem.Biophys.Res.Comm.2003，307：759-64)，然而該方法雖然有較高的靶向性，但表達水平偏低，并且特異性啟動子僅能應用于一種腫瘤，隨著其分化外源基因的表達水平會降低或消失。

通過成熟mRNA翻譯水平的調控獲得靶向性基因表達，對外源插入基因進行適當的改造，使得其轉錄產生的mRNA的5’非編碼區或3’非編碼區增加一段調節結構，通過基因翻譯水平調節將會獲得一種針對多種腫瘤細胞的靶向表達系統。

復制溶瘤型靶向腺病毒載體，其部分病毒基因被完全或部分刪除貨部分突變，現有產品應用。

腺病毒載體早期基因編碼蛋白E1A(E1A-12S和E1a-13)和E1B(E1B-55K和E1B-19K)通過激活病毒基因表達和解除調控細胞周期來介導病毒復制。因此用于基因治療的第一代腺病毒載體(E1A區蛋白表達缺陷型腺病毒)被認為不能在細胞中進行復制(Jones，N.et.al.PNAS.1979，76：3665-9)。然而大量研究表明，第一代腺病毒感染的腫瘤細胞中有病毒早晚期蛋白的表達(Steinwaerder，DS.et.al.Hum.Gene.Ther.2000，11：1933-48；Jane?SM.et.al.Ann.Med.1998，30：413-5；Lieber，A.et.al.J.Virol.1996，70：8944-60)，而正常肝臟細胞中沒有檢測導病毒DNA的復制和早晚期蛋白的表達(Nelson?JE.Et.al.J.Virol.1997，71：8902-7)。某些腫瘤細胞蛋白可能代替E1區蛋白的功能，激活了病毒的復制(Jones，N.et.al.PNAS.1979，76：3665-9；Steinwaerder，DS.et.al.Hum.Gene.Ther.2000，11：1933-48；JaneSM.et.al.Ann.Med.1998，30：413-5)。腺病毒DNA的復制導致基因重組，基因重組程度和復制頻率成比例，直到感染周期的晚期，腺病毒的基因組都能進行重組(Young?CS.Et.al.Curr.Top.Microbiol.Immunol.1995，199：89-108)。