[發(fā)明專利]利用酶活性的競爭性干擾和恢復(fù)檢測被分析物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810188233.3
• 申請日: 2008-12-19
• 公開（公告）號: CN101463388A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏東元
• 申請（專利權(quán)）人: 博爾誠（北京）科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/25
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 曹津燕

1.一種測定溶液中被分析物濃度的方法，該方法用于非診斷目的， 其中該方法包括：

選擇結(jié)合化合物；

選擇被分析物的類似物，并使類似物與多核苷酸底物結(jié)合，構(gòu)成利用 期望的多核苷酸反應(yīng)測定分析溶液中被分析物的含量的試劑；以及其中分 析溶液中試劑與結(jié)合化合物的結(jié)合，與分析溶液中被分析物與結(jié)合化合物 的結(jié)合相競爭；

選擇期望的酶用于催化期望的多核苷酸反應(yīng)；

針對分析溶液中特定被分析物的濃度和預(yù)先選定的期望的酶的量，確 定結(jié)合化合物與試劑的期望比率；

形成包含一定量結(jié)合化合物和含量待測的被分析物的分析溶液；

將一定量的試劑加到分析溶液中，其中試劑的量和結(jié)合化合物的量達 到期望的結(jié)合化合物與試劑的比率；

將預(yù)先選定量的期望的酶加到分析溶液中，催化期望的多核苷酸反 應(yīng)；以及

檢測期望的多核苷酸反應(yīng)中期望的酶的活性來確定分析溶液中被分 析物的含量；

所述期望的多核苷酸反應(yīng)為循環(huán)進行的使用DNA聚合酶的核苷酸聚 合反應(yīng)和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反應(yīng)；

當(dāng)所述期望的多核苷酸反應(yīng)為循環(huán)進行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反應(yīng)和λ-使用核酸外切酶的核苷酸裂解反應(yīng)時，所述多核苷酸底物為 單鏈DNA；

當(dāng)所述期望的多核苷酸反應(yīng)為循環(huán)進行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反應(yīng)和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反應(yīng)時，分別通過使用PPi 分析和單核苷酸分析來檢測釋放的PPi和dNMPs，進而檢測酶活性。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)合化合物為配體結(jié)合分子。

3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)合化合物為抗體。

4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)合化合物為細胞受體。

5.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述類似物包含被分析物的結(jié)構(gòu)。

6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述類似物為具有被分析物分子結(jié) 構(gòu)的化合物。

7.一種用于競爭性結(jié)合分析的試劑，其中該試劑包括：

與類似物結(jié)合的多核苷酸底物，其中選擇的類似物（i）與分析溶液中 預(yù)先選定的結(jié)合化合物相結(jié)合；并且（ii）與分析溶液中被分析物與預(yù)先 選定的結(jié)合化合物的結(jié)合相競爭；而且

其中選擇的多核苷酸底物參與期望的多核苷酸反應(yīng)，該多核苷酸反應(yīng) 被分析溶液中結(jié)合化合物與類似物的結(jié)合而抑制或終止；

所述期望的多核苷酸反應(yīng)為循環(huán)進行的使用DNA聚合酶的核苷酸聚 合反應(yīng)和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反應(yīng)；

當(dāng)所述期望的多核苷酸反應(yīng)為循環(huán)進行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反應(yīng)和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反應(yīng)時，所述多核苷酸底物為 單鏈DNA。

8.權(quán)利要求7所述的試劑，其中所述結(jié)合化合物為配體結(jié)合分子。

9.權(quán)利要求7所述的試劑，其中所述結(jié)合化合物為抗體。

10.權(quán)利要求7所述的試劑，其中所述結(jié)合化合物為細胞受體。

11.權(quán)利要求7所述的試劑，其中所述類似物包含被分析物的結(jié)構(gòu)。

12.權(quán)利要求7所述的試劑，其中所述類似物為具有被分析物分子結(jié) 構(gòu)的化合物。