[發明專利]LDP蛋白作為腫瘤靶向藥物導向載體的應用

有效

• 申請號: 200810094299.6
• 申請日: 2008-04-25
• 公開（公告）號: CN101259287A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發明（設計）人: 蔡琳;甄永蘇;吳淑英;金蓮舫;商悅
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K47/42;A61K45/06;A61P35/00
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所
• 代理人: 楊厚;王為

技術領域：

本發明涉及一種可與人體腫瘤組織特異性結合的LDP蛋白；本發明還涉及LDP蛋白作為腫瘤靶向藥物導向載體的新用途。

背景技術：

LDP蛋白是抗腫瘤抗生素LDM的兩個組成成分之一。LDP由110個氨基酸殘基組成，分子量10.5kDa，其對LDM的另一個組分烯二炔結構的發色團(AE)起著保護作用，后者分子量843Da，具有細胞毒作用但不穩定。所述兩部分可以拆分和重建，且重建后的分子與天然LDM的細胞毒作用相同。體內動物實驗表明，LDM對小鼠結腸癌26、移植于裸鼠的人肝癌Bel-7402和盲腸癌Hce-8693等多種人體移植腫瘤均有顯著療效[中國抗生素雜志1994，19(2)：164-168]。

LDP蛋白含有110個氨基酸，羥基氨基酸如絲氨酸和蘇氨酸，以及疏水氨基酸如甘氨酸和纈氨酸所占比例較高，氨基端為丙氨酸，羧基端為甘氨酸。LDP含有兩個二硫鍵，一個位于Cys(36)和Cys(45)之間；另一個位于Cys(86)和Cys(91)之間。采用核二維核磁共振方法，對LDP的三維結構研究表明，LDP是由3條反向平行的β片層組成，有一個疏水性口袋，發色團可結合到此疏水性口袋中，其烯二炔位于口袋中心。

本發明所涉及的抗LDP的單抗，來自穩定型雜交瘤細胞株3H8的無血清培養細胞上清，為IgG1亞型單克隆抗體。

本實驗室首次采用免疫組織化學方法，結合組織芯片技術，證明LDP具有可與多種腫瘤組織特異性結合的重要功能，其結合能力與相應正常組織比較具有顯著性差異，且LDP結合腫瘤組織的能力與某些腫瘤治療靶點相關。涉及LDP具有可與多種腫瘤組織特異性結合的重要新功能，迄今尚未見有相關報道。

本發明的目的，在于通過組織芯片技術，檢測LDP蛋白與腫瘤組織的特異性結合；

本發明的另一目的，在于提供LDP蛋白作為腫瘤靶向藥物導向載體的應用。

發明內容：

本發明提供了LDP蛋白制備方法。

本發明提供了LDP蛋白可與人體腫瘤組織特異性結合的實驗研究，具體包括：

組織芯片技術檢測LDP與高密度多腫瘤組織芯片的結合；

組織芯片技術檢測LDP在乳腺癌、肺癌、結腸癌與其相應正常組織的結合差異。

本發明還提供了LDP靶向腫瘤組織的能力與某些腫瘤治療靶點相關性實驗，具體包括：

組織芯片技術檢測LDP與乳腺癌的結合能力及其與VEGF和HER2的相關性；

組織芯片技術檢測LDP與肺癌的結合能力及其與VEGF和EGFR的相關性；

組織芯片技術檢測LDP與結腸癌的結合能力及其與VEGF的相關性。

本發明也提供了LDP可與體外培養腫瘤細胞結合的實驗研究，具體包括：

流式細胞術檢測LDP與腫瘤細胞的結合；

激光共聚焦顯微鏡檢測腫瘤細胞對LDP的內化。

根據LDP蛋白能與腫瘤細胞特異性結合的特點，可將LDP蛋白作為腫瘤靶向藥物導向載體，采用常規方法，與多種具有抗腫瘤作用的相關活性蛋白或小分子化合物進行融合或偶聯，形成靶向藥物用于臨床治療。

發明效果：

本發明的優點和積極效果在于，首次發現并證明，LDP蛋白具有和人體腫瘤組織特異性結合的能力，且與相應正常組織比較具有明顯差異，更進一步發現，LDP結合腫瘤組織的能力與某些腫瘤治療靶點包括EGFR、HER2、VEGF顯著相關，LDP可與體外培養的腫瘤細胞結合并能被內化。由于LDP本身具有特異性結合腫瘤組織的能力，因此，可作為腫瘤靶向藥物的導向載體。又由于其結合腫瘤組織的能力與某些腫瘤治療靶點顯著相關，可利用基因工程的方法，將其與某些腫瘤治療靶點的配體制成一系列針對特定腫瘤的融合蛋白，從而進一步提高其導向能力。因此，本發明在抗腫瘤新藥研制以及腫瘤靶向治療方面具有良好的應用前景。

附圖說明：

圖1-LDP與高密度多腫瘤組織芯片結合的典型圖像

其中：A-胃癌；B-結腸癌；C-胰腺癌；D-甲狀腺乳頭狀癌；E-皮膚鱗癌；F-膀胱移行細胞癌；G-乳腺侵潤性導管癌；H-子宮內膜癌；I-卵巢乳頭狀癌；J-前列腺癌。放大倍數100倍。

圖2-組織芯片技術檢測LDP與乳腺癌及其相應正常組織的結合

其中：A-乳腺癌組織，可見癌細胞呈陽性染色；B-正常乳腺組織，無陽性染色。放大倍數100倍。

圖3-組織芯片技術檢測LDP與肺癌及其相應正常組織的結合

其中：A-肺癌組織，可見癌細胞呈陽性染色；B-正常肺組織，無陽性染色。放大倍數200倍。