[發明專利]用于吸附、分離、檢測超微量靶蛋白的系統及其用途

有效

• 申請號: 200810089486.5
• 申請日: 2008-04-03
• 公開（公告）號: CN101246178A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 于中連;馬慶偉;趙洪斌;呂芳;呂萍萍
• 申請（專利權）人: 毅新興業（北京）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N30/00;B01D15/08;B01J20/281
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1.一種用于吸附、分離、純化、質譜檢測超微量靶蛋白的系統，其特征包括：

(1)分離填料；和

(2)用于固定分離填料并使其與溶液結合以及吸取溶液的中空管；

(3)如果需要，分離填料上下面含有用于固定分離填料的支撐網；

(4)用于吸附靶蛋白的結合緩沖液、用于洗去微珠中雜質的洗滌緩沖液、用于洗脫微珠上靶蛋白的洗脫緩沖液；

(5)用于活化微珠的活化緩沖液；

其中所述的分離填料是直徑約在10-10³μm級或10³nm級的微珠組成，該微珠具有生理性無毒、生物高相容性的高分子材料內層和可逆結合或釋放靶蛋白的官能團外層，所述的內層高分子材料選自聚氨化合物、聚酸化合物、蛋白、膠體物、二氧化硅、環氧化合物或以上共聚物，所述官能團選自-COOH、-CHO、-NH₂、-SH、-S-S、環氧基、羰基；和

其中所述的中空管上端孔徑大于下端孔徑，上端孔同移液器前端吻合，分離填料被固定在中空管的中部或上部，通過移液器的吸取作用從下端孔吸入溶液并接觸分離填料。

2.權利要求1中所述的系統，其中用于制備所述的中空管和/或支撐網的材料是選自木質、紙質、塑料、玻璃、金屬、礦物質的無機或有機惰性材料。

3.權利要求1或2所述的系統，其中聚酸化合物選自聚乳酸、乳酸與乙醇酸共聚物、聚羥基酸、3-羥基丁酸和3-羥基己酸共聚物；蛋白選自膠原、纖維蛋白、纖維粘連蛋白、白蛋白或共聚物；膠體物選自硅膠、明膠、羅望子膠、沙蒿膠、黃原膠、瓜爾豆膠或共聚物。

4.權利要求1或2所述的系統，其中根據分離的靶蛋白對微珠官能團外層進行特殊修飾，所述的特殊修飾包括離子交換修飾、疏水作用修飾、親水作用修飾、金屬鰲合/配位親和修飾。

5.權利要求1或2所述的系統，其中靶蛋白包括膜蛋白、弱酸弱堿蛋白、糖蛋白、脂蛋白、金屬親和蛋白、抗體蛋白、磷酸化蛋白.。

6.前述任一權利要求所述的系統用于吸附、分離、純化、質譜檢測超微量蛋白的方法，包括：

(1)用結合緩沖液稀釋或溶解含靶蛋白的混合物，和；

(2)將含有分離填料的中空管的上端孔套入移液器的前端，和；

(3)通過移液器，吸取含靶蛋白的結合緩沖液，并使其反復經過分離填料，使得靶蛋白與微珠充分結合，和；

(4)棄去結合緩沖液，通過移液器吸取洗滌緩沖液，充分洗去未結合分離填料的雜質，和；

(5)棄去洗滌緩沖液，通過移液器吸取洗脫緩沖液，從分離填料洗脫靶蛋白，并收集靶蛋白洗脫液；

(6)通過質譜檢測洗脫液中的靶蛋白。

7.權利要求6所述的方法，其中還包括在吸取含靶蛋白的結合緩沖液之前，用移液器吸取活化緩沖液，以活化分離填料的微珠表面。

8.權利要求1-5任一所述的系統用于制備質譜檢測超微量靶蛋白的產品中的用途。