[發明專利]一種豬2型圓環病毒疫苗的制備方法

無效

• 申請號: 200810079560.5
• 申請日: 2008-10-10
• 公開（公告）號: CN101376026A
• 公開（公告）日: 2009-03-04
• 發明（設計）人: 喬云龍;孫建剛
• 申請（專利權）人: 山西海森生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 山西五維專利事務所（有限公司）
• 代理人: 李毅

技術領域

本發明屬于生物疫苗制備技術領域，涉及一種豬用疫苗的制備方法，特別是涉及一種豬2型圓環病毒疫苗的制備方法。

背景技術

豬2型圓環病毒(PCV2)是一種新的豬傳染病，主要引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合癥和腎病皮炎綜合癥，同時在一定程度上還會產生免疫抑制，造成其它疾病的繼發和并發感染。20世紀90年代加拿大首次暴發該病，隨后世界上許多國家和地區都有該病發生的報道，給養豬業造成了嚴重的經濟損失。PCV2是一種DNA病毒，病毒的變異率低，在細胞培養中不產生細胞變異，難以產生高滴度的病毒粒子，用常規技術制備PCV2疫苗十分不便，因此，至今國內外均無豬2型圓環病毒的常規疫苗上市，缺乏對該病的有效防治措施，同時也沒有對該病的有效治療藥物和有效控制能力。隨著科技的發展，人們對于將豬器官用于人中異種移植的興趣不斷增加，而目前的現狀無形中對人造成了潛在的公共衛生危險。

中國專利CN101240264A“豬圓環病毒2型滅活疫苗”公開了一種從病豬場采集病料，進行病毒分離、純化后，接種至PK-15細胞中大量增殖，然后經甲醛滅活，加入白油佐劑乳化，制備成常規白油佐劑疫苗的方法。該項技術存在的問題是病毒的增殖難度大、成本高、難于大量供應疫苗來滿足生產需求。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬2型圓環病毒疫苗的制備方法，利用病豬的敏感內臟器官作為病毒源材料，通過滅活工藝制成豬2型圓環病毒滅活疫苗，以解決目前對豬2型圓環病毒無法預防的問題。

本發明的豬2型圓環病毒疫苗的制備方法是:

1).選擇剛病死的典型2型圓環病毒豬或典型發病的2型圓環病毒豬，在無菌條件下從其體內分離出臟器組織，用膠體磨研磨，過濾除去雜質，得到臟器組織提取物，按照臟器組織提取物∶甲醛＝40∶1的體積比加入甲醛，在30℃條件下滅活5天，過濾除菌，以生理鹽水稀釋至臟器組織提取物的體積濃度為40％，制成原始滅活疫苗，存放于2～8℃環境下備用；

2).將上述疫苗接種到健康豬體內，促使其發?。?/p>

3).當接種的健康豬呈典型2型圓環病毒發病或死亡時，在無菌條件下采集臟器組織，用膠體磨研磨，過濾除去雜質，得到臟器組織提取物，按照臟器組織提取物∶甲醛＝40∶1的體積比加入甲醛，在30℃條件下滅活5天，過濾除菌，以生理鹽水稀釋至臟器組織提取物的體積濃度為40％，制成豬2型圓環病毒滅活疫苗，分裝在滅菌瓶中，存放于2～8℃環境下備用。

上述臟器組織提取物是指在無菌條件下，從典型豬2型圓環病毒發病或死亡的豬體內采集的內臟器官心、肝、脾、肺和腎臟的提取物。

本發明制備得到的豬2型圓環病毒疫苗的體積百分比組成為:

甲醛????????????????????????????1％

臟器組織提取物??????????????????40％

生理鹽水????????????????????????59％。

如果以豬場內的病死豬制作原始疫苗，生產豬2型圓環病毒滅活疫苗后仍接種于該豬場預防豬2型圓環病毒，則效果更好。

本發明的豬2型圓環病毒疫苗的使用方法是:在仔豬5日齡時，每頭豬肌肉注射豬2型圓環病毒滅活疫苗2mL。

選擇健康的5日齡仔豬20只作為供試對象，分為兩組，每組10只。免疫組每頭豬肌肉注射豬2型圓環病毒滅活疫苗2mL，對照組不接種免疫，觀察其健康狀況。

采集一典型2型圓環病毒病死豬的內臟，以膠體磨研磨后，制成豬2型圓環病毒提取液。

25日后，向試驗仔豬注射豬2型圓環病毒提取液，兩組豬均注射，每頭豬肌肉注射1mL，進行強毒攻擊，觀察豬的病、死情況。

試驗結果顯示，免疫組全部10只仔豬中，8只健活，沒有發病癥狀，2只有發病癥狀，無死亡情況發生；對照組10只仔豬全部發病，死亡6只。免疫組與對照組相比，免疫保護率達80％。

本發明利用病豬的的各敏感內臟器官作為原始滅活疫苗，再接種至健康豬體內生產制備豬2型圓環病毒滅活疫苗，制備出的疫苗抗原性好，免疫保護率高，解決了目前豬2型圓環病毒疫苗生產中的病毒增殖難度大、生產成本高的問題。

本發明的豬2型圓環病毒滅活疫苗制備方法簡單，使用方便，便于推廣應用。

具體實施方式

實施例1