[發(fā)明專利]融合多肽及其用于制備抗腫瘤、抗病毒和胞內(nèi)寄生菌感染藥物的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810069611.6
• 申請日: 2008-04-30
• 公開（公告）號: CN101260157A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬瑛;劉婷;鄒麗云;吳玉章
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/04;C07K1/107;A61K38/16;A61P35/00;A61P31/12;A61P33/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種融合多肽及其用于制備抗腫瘤、抗病毒和胞內(nèi)寄生菌感染藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤是導(dǎo)致人類死亡的主要原因，至今還沒有有效的治療方法。目前對腫瘤的治療主要采用非特異性治療方法，如外科手術(shù)，放射療法和化學(xué)療法。這些傳統(tǒng)療法對腫瘤雖然具有一定的療效，但存在許多缺點(diǎn)，例如，手術(shù)主要用于局部實(shí)體瘤的治療，而放射療法和化學(xué)療法又具有很強(qiáng)的毒副作用。免疫療法以其特異性治療的優(yōu)勢成為腫瘤治療的一個新策略，但由于腫瘤抗原的免疫原性較弱，不能被機(jī)體免疫系統(tǒng)有效的識別和遞呈，難以刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的抗腫瘤免疫應(yīng)答，成為免疫療法用于腫瘤治療的一大瓶頸。

病毒性疾病是威脅人類生命健康的一類重要疾病，不僅具有較強(qiáng)的傳染性，還易發(fā)生并發(fā)癥，死亡率較高，且目前仍未發(fā)現(xiàn)切實(shí)有效的治療方法。一旦發(fā)病，只能采取對癥治療和支持療法，雖然在一定程度上使其病癥得以暫時緩解，但還不能達(dá)到完全治愈的目的，因此需要依靠患者自身的抗病毒免疫將病毒清除。

某些胞內(nèi)寄生菌侵入人體后大部分時間停留在宿主細(xì)胞內(nèi)并繁殖，例如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌、布氏桿菌等均屬此類。由于抗體不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，所以體液免疫對這類細(xì)菌感染的作用受到限制，對胞內(nèi)感染的防御功能主要靠細(xì)胞免疫。

抗原交叉遞呈是指外源性抗原被抗原遞呈細(xì)胞攝取后，加工處理為8-10個氨基酸的短肽，并與主要組織相容性復(fù)合物(MHC)I類分子結(jié)合，呈遞到細(xì)胞表面，從而活化細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的過程，且研究發(fā)現(xiàn)，交叉遞呈在機(jī)體抗腫瘤、抗病毒及某些胞內(nèi)寄生菌感染等方面發(fā)揮著重要的作用。體內(nèi)的專職抗原遞呈細(xì)胞包括：巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞(DC)，其中DC是體內(nèi)最有效的專職抗原遞呈細(xì)胞，也是抗原交叉遞呈的主要參與者。目前認(rèn)為，DC吞噬和遞呈抗原的過程伴隨著細(xì)胞骨架蛋白的重新排列，而肌動蛋白細(xì)胞骨架主要由Rho?GTPase家族調(diào)控，該家族至少由23個成員組成，其中以RhoA，Rac1和Cdc42研究最為廣泛。Rho?GTPase家族不僅參與調(diào)控細(xì)胞骨架的排列及細(xì)胞的內(nèi)吞作用，而且在DC的抗原遞呈中也發(fā)揮著重要的作用。RhoGTPase家族具有高度的同源性，各成員間最主要的差別在于其高變的羧基末端區(qū)，且研究認(rèn)為Rho?GTPase發(fā)揮其生理功能依賴于其羧基末端區(qū)。

自然界中存在一些天然的具有穿透細(xì)胞膜功能的蛋白，而這些蛋白中的某些片段是發(fā)揮其穿透細(xì)胞膜功能所必需的，稱之為蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)(proteintransduction?domain)或穿膜肽(cell-penetrating?peptides)。人類免疫缺陷病毒(HIV)的Tat蛋白即是具有穿透細(xì)胞膜功能的蛋白之一，其穿透細(xì)胞膜的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)是Tat蛋白的47～57號11個氨基酸殘基組成的多肽片段(Tat_47～57)。研究發(fā)現(xiàn)，Tat穿膜肽可以將異源性的多肽或蛋白質(zhì)帶進(jìn)細(xì)胞，所以利用Tat穿膜肽與Rho?GTPase家族蛋白的羧基末端區(qū)連接形成融合多肽，從而增強(qiáng)RhoGTPase家族蛋白羧基末端多肽的細(xì)胞膜穿透性。

因此，本領(lǐng)域迫切要求研制能夠促進(jìn)抗原交叉遞呈作用的生物類藥物，使其在機(jī)體抗腫瘤、抗病毒及某些胞內(nèi)寄生菌感染等方面發(fā)揮重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，為了克服目前機(jī)體抗腫瘤、抗病毒及某些胞內(nèi)寄生菌感染等方面不理想的問題，本發(fā)明的目的是提供一種融合多肽用于制備抗腫瘤、抗病毒和胞內(nèi)寄生菌感染的藥物。

所述融合多肽，由多肽I和多肽II通過柔性氨基酸接頭連接在一起，所述多肽I為：人類免疫缺陷病毒Tat蛋白的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)47～57號氨基酸殘基組成的多肽或此多肽的改造片段，具有SEQ?ID?NO1的氨基酸序列，所述多肽II為：Ras相關(guān)C3肉毒桿菌毒素底物1Ras-related?C3?botulinum?substrate?1，Rac1蛋白羧基末端的11個氨基酸殘基組成的多肽，具有SEQ?ID?NO2的氨基酸序列；

進(jìn)一步，所述融合多肽，其多肽I具有SEQ?ID?NO3的氨基酸序列；

進(jìn)一步，所述融合多肽，其多肽I具有SEQ?ID?NO4的氨基酸序列；

進(jìn)一步，所述融合多肽，其多肽I具有SEQ?ID?NO5的氨基酸序列；

進(jìn)一步，所述融合多肽，其多肽I具有SEQ?ID?NO6的氨基酸序列；

進(jìn)一步，所述的融合多肽的Rac1蛋白的羧基末端為人源或小鼠來源；

進(jìn)一步，所述融合多肽的合成采用標(biāo)準(zhǔn)9-芴甲氧羰基固相合成法合成；