[發(fā)明專利]一種用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810063583.7
• 申請日: 2008-06-27
• 公開（公告）號: CN101315368A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 柳愛春;趙蕓;劉超;鄒禮根;童朝明;徐曉丹
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 金祺

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒。

背景技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA)是將酶的催化反應(yīng) 與抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合起來的一種檢測技術(shù)。由于抗原、抗體反應(yīng)的高度專一性， 加之酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，因此能使測定方法達到很高的特 異性和靈敏度。近年來，ELISA以其靈敏、準確、重復(fù)性好、無放射性污染等特點，被廣 泛應(yīng)用于病毒、細菌、激素、藥物殘留等各個方面檢測。

但目前使用的ELISA試劑盒因抗體、酶標記物等試劑為液體，因而需要在冰箱中冷藏 保存，在郵寄過程中也需要采用冰袋、保溫箱等降溫措施以防試劑盒失效；而且通常在使 用前需要使用者本人用常用的實驗試劑臨時配制一些緩沖液；目前堿性磷酸酶標記的 ELISA試劑目前缺少合適的指示劑，操作過程容易出差錯；其通常用終止液為強堿(3mol/l 氫氧化鈉)，具有腐蝕性；試驗過程需要購買價格昂貴的移液器，從而導(dǎo)致ELISA試劑盒 僅局限于在有條件的實驗室內(nèi)由有ELISA操作經(jīng)驗的檢測人員使用。

綜上所述，現(xiàn)有ELISA試劑盒存在著以下不足：

1、因試劑盒含抗體溶液、酶標記物溶液、樣品稀釋緩沖液(濃縮液)等多種液體試 劑，使試劑盒需要冷藏保存，導(dǎo)致攜帶、郵寄不方便；而且試劑盒在使用過程中的反復(fù)回 溫使抗體和酶的效價易受影響，多次吸取溶液的過程中易造成損失和污染，有時因停電或 冰箱故障會造成所有試劑盒失效。

2、生物安全性差：目前常用的植物病毒檢測試劑盒的質(zhì)控樣是通過將陽性或陰性樣品 提取物直接進行冷凍干燥制得。雖然病毒在常溫中干燥條件下易被滅活，但若冷凍后再進 行真空干燥，則可使病毒長期存活。

3、ELISA是一種操作要求非常精細的試驗，目前堿性磷酸酶標記的ELISA試劑目前缺 少合適的指示劑，操作過程容易出差錯，尤其在TSA-ELISA(三抗夾心型)試劑盒中含有 檢測抗體和酶標抗-抗體兩種無色微量貴重試劑，若不加以明顯的區(qū)別標識，更容易出差 錯。

4、目前常用的3mol/L氫氧化鈉終止堿性磷酸酶反應(yīng)，結(jié)果只能保持數(shù)小時，而且氫 氧化鈉具有腐蝕性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的上述技術(shù)問題并提供一種用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒，該ELISA試 劑盒攜帶、使用更方便，安全性好，且能滿足現(xiàn)場檢測需求。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒，包括盒體， 在盒體內(nèi)設(shè)有抗體檢測板、樣品稀釋試劑、陽性/陰性對照、洗滌試劑、酶結(jié)合物試劑、底 物試劑、終止試劑、一次性滴管和蓋板膜，底物試劑由底物、底物稀釋劑和指示劑II組成； 底物稀釋劑為濃縮液，樣品稀釋試劑、洗滌試劑、酶結(jié)合物試劑、終止試劑、底物和指示 劑II均為固態(tài)。

作為本發(fā)明的用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒的改進：陽性/陰性對照為經(jīng)病毒/病菌滅活 的質(zhì)控樣，所用的滅活劑為β-丙內(nèi)酯，滅活劑與試樣體積比為1∶1000～1∶6000。

作為本發(fā)明的用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒的進一步改進：試劑盒為雙抗夾心型，酶 結(jié)合物試劑含酶標抗體和酶結(jié)合物稀釋劑，在酶結(jié)合物稀釋劑中添加指示劑I。或者試劑 盒為三抗夾心型，酶結(jié)合物試劑含檢測抗體、酶標抗-抗體和酶結(jié)合物稀釋劑；先將指示劑 I與無關(guān)蛋白發(fā)生疏水結(jié)合，再將檢測抗體或酶標抗-抗體與上述結(jié)合處理后的指示劑I保 存在一起。

作為本發(fā)明的用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒的進一步改進：酶結(jié)合物稀釋劑在實際使 用時稀釋成常規(guī)的酶結(jié)合物稀釋緩沖液，指示劑I在酶結(jié)合物稀釋緩沖液中的濃度為 0.01mg/mL～0.1mg/mL，指示劑I為甲基橙、甲基紅、苯酚紅、溴甲酚綠、溴百里香酚 蘭、茶酚綠、酸性鉻蘭K或亞甲基蘭。

作為本發(fā)明的用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒的進一步改進：底物稀釋劑在實際使用時 稀釋成常規(guī)的底物稀釋液，指示劑II為孔雀石綠，臨用前加入底物稀釋液中，指示劑II在 底物稀釋液中濃度為0.05mg/mL～0.06mg/mL。

作為本發(fā)明的用于現(xiàn)場檢測的ELISA試劑盒的進一步改進：抗體用堿性磷酸酶標記， 終止試劑在實際使用時稀釋成終止液，所述終止液為含0.5～2.0mol/L碳酸鈉和0.1g/L～5 g/L亞硫酸鈉的水溶液。