[發明專利]一種抗稻飛虱基因RPH1及其編碼產物與應用

無效

• 申請號: 200810062729.6
• 申請日: 2008-07-01
• 公開（公告）號: CN101319218A
• 公開（公告）日: 2008-12-10
• 發明（設計）人: 婁永根;周國鑫;齊金峰;任楠;毛碧增
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;A01H1/00;A01H5/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別地，涉及一種抗稻飛虱基因RPH1及其編碼產物與應用。

背景技術

隨著全球人口的增加和耕地面積的減少，人們對糧食單產的要求越來越高。蟲害造成的糧食損失一般約占糧食總產量的10-30％，重災年份則顆粒無收，因此如何減少蟲害以增加糧食總產量，是人們面臨的迫切問題。培育抗性品種是減少害蟲危害的一個重要措施。

稻飛虱屬于同翅目飛虱科，主要包括褐飛虱Nilaparvata?lugens()、白背飛虱Sogatella?furcifera等，是我國水稻上的最重要害蟲之一。近幾年來，則為稻飛虱主要種類之一的褐飛虱，更是年年大暴發，對我國水稻糧食生產造成了嚴重危害。據浙江省農業廳調查統計，2005年浙江省第5代褐飛虱發生量每667m²達30萬頭以上的有66.7萬hm²，占水稻總種植面積的86％；每667m²在100萬頭以上的有33.3萬hm²，占42％；最高田塊的發生量達到每667m²1000萬頭以上；絕收的面積達5333hm²，造成直接水稻產量損失120萬噸。造成褐飛虱近幾年來特大爆發的一個重要原因，是目前生產上缺乏抗稻飛虱的水稻品種。因此，發掘抗稻飛虱基因，培育抗稻飛虱品種，將是控制稻飛虱危害的一個重要方面。

至今，國內外已在水稻抗稻飛虱基因鑒定與定位等方面取得了很大成績。至今已命名了13個抗褐飛虱的主基因，并對其中的8個進行了染色體定位；此外，也鑒定和定位了10多個抗褐飛虱的數量形狀基因座(QTL)。對抗白背飛虱的主基因已命名了6個，并對其中的2個進行了定位；同時，也有10多個抗白背飛虱的數量形狀基因座被鑒定和定位。然而，至今為止，國內外尚沒有克隆到水稻的抗稻飛虱基因。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種抗稻飛虱基因RPH1及其編碼產物與應用。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種抗稻飛虱基因RPH1，它具有SEQ?ID?No.1的DNA序列。

一種權利要求1所述抗稻飛虱基因RPH1的編碼蛋白，它包含SEQ?ID?No.2的氨基酸序列的蛋白質，或者是將SEQ?ID?No.2的氨基酸殘基序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或者添加且具有與SEQ?ID?No.2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ?ID?No.2衍生的蛋白質。

一種權利要求1所述抗稻飛虱基因RPH1在轉基因植物中的應用。

一種權利要求1所述抗稻飛虱基因RPH1在作物育種中的應用。

本發明的有益效果是，本發明利用SSH方法和基因芯片技術分析了水稻在害蟲為害后的差異表達基因，結合RT-PCR和RACE技術分離獲得了RPH1基因；以RPH1基因片段合成同位素探針，應用Northern雜交方法分析了RPH1基因在飛虱為害后的表達情況；利用水稻基因組數據庫對RPH1基因進行了染色體定位，并通過將RPH1蛋白與綠色熒光蛋白GFP融合結合激光共聚焦技術對RPH1蛋白進行了亞細胞定位，發現RPH1蛋白在葉綠體內表達。利用基因沉默和過量表達技術分析了RPH1基因的生物學功能，發現RPH1基因在水稻對稻飛虱的抗性中發揮著重要作用。該基因的分離克隆，對于作物的抗蟲育種，尤其對水稻的抗稻飛虱育種將起到重要的促進作用。

附圖說明

圖1是RPH1基因特異PCR擴增產物凝膠電泳圖；

圖2是pMD-19-RPH1酶切鑒定凝膠電泳圖；

圖3是水稻受稻飛虱為害后RPH1基因的表達情況電泳圖；

圖4是RPH1基因在水稻染色體上的定位圖；

圖5是RPH1基因編碼蛋白的亞細胞定位圖；

圖6是以RPH1全長構建的過量表達質粒圖譜；

圖7是反義抑制基因RPH1水稻的抗稻飛虱測定圖。

具體實施方式