[發明專利]一種利用鞘氨醇單胞菌發酵萃取耦合制備輔酶Q10的方法

有效

• 申請號: 200810062350.5
• 申請日: 2008-05-09
• 公開（公告）號: CN101307337A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 鐘衛鴻;方建軍;柳華貴;鐘莉;李炎生;李藝瀟;汪新;張艾曉
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

(一)技術領域

本發明涉及一種利用鞘氨醇單胞菌發酵萃取耦合制備輔酶Q₁₀的方 法，尤其是一種利用鞘氨醇單胞菌ZUTE03(CCTCC?NO：M?207084)發 酵萃取耦合制備輔酶Q₁₀的方法。

(二)背景技術

輔酶Q₁₀(CoenzymeQ₁₀，CoQ₁₀)廣泛存在于動物、植物及微生物體 內，是生物細胞呼吸鏈中重要的遞氫體，也是一種良好的生化藥物(Nazzal S，Nutan?M，Palamakulaa，et?al.Optiimization?of?a?self-nanoemulsified?tablet dosage?form?of?Ubiquinone?using?response?surface?methodology. International?Journal?of?Pharmaceutics，2002，240：103-114.)。它具有抗氧化 性、消除自由基、提高機體免疫力等功能(Ernster?L.Facts?and?ideas?about the?function?of?coenzyme?Q₁₀?in?the?Mitochondria.Elservier?Amsterdam.1977， 23：15-18.)，已廣泛應用于各類心臟病、糖尿病、癌癥、急慢性肝炎、帕 金森癥等疾病的治療。(Jin-Ho?Choi，Yeon-Woo?Ryu，Jin-Ho?Seo，et?al. Biotechnological?production?and?applications?of?Coenzyme?Q₁₀.Appl Microbiol?Biotechnol，2005，68：9-15.)最近，研究者發現輔酶Q₁₀具有抗衰 老作用，從而將其應用擴展到化妝品和保健品領域，使其在國內外的需求 進一步擴大。(張延靜，袁其朋，梁浩，等.產輔酶Q₁₀酵母的發酵條件研究. 微生物學通報，2003，30(2)：65-69.)另外，近年來科學研究表明，輔酶Q₁₀對感染HIV的病人亦有輔助治療的功效，目前這方面的應用正處于II期臨 床階段(姜傳福.輔酶Q₁₀的制備及其藥物功能.石油化工高等學校學報. 2005，18(4)：52-81.)。

制備輔酶Q₁₀的方法主要有動物細胞提取法、煙葉茄呢醇半合成法、 完全合成法、微生物發酵法或植物細胞培養法(王青云，王發祥，鐘士清，等. 微生物發酵生產輔酶Q₁₀的研究進展.化學與生物工程，2006，23(8)： 11-13.)。與其他方法相比，微生物發酵法具有產物活性高、原料成本低、 易控制及可實現大規模生產等特點(Meganathan?R.Ubiquinone biosynthesis?in?microorganisms.FEMS?Microbiology?Letters，2001， 203：131-139.)。

通過發酵收集到菌體后大致通過下面兩種方法來提取輔酶Q₁₀。(1) 不經皂化的提取分離方法：將菌體破碎后直接用丙酮或沸騰酒精抽提，后 用石油醚萃取多次，再用水或甲醇洗去極性物質，經硅膠柱純化。(2)醇 堿或堿皂化提取法：用醇堿先皂化后用石油醚或正已烷回流提取，水洗后 同樣經硅膠柱純化(韓少英，竇??潔，周長林.發酵法生產輔酶Q₁₀的研究 進展.藥物生物技術，2006，13(3)：227-232.)。同直接提取法相比，皂化后 提取法得到的提取物量較多，但輔酶Q₁₀容易被破壞且步驟煩瑣，費時費 力，且提取溶劑損耗較大。

(三)發明內容

本發明即是為了對現有發酵提取工藝進行簡化和優化，提供一種萃取 溶劑回收率高、方法簡便、輔酶Q₁₀收率高的利用鞘氨醇單胞菌發酵萃取 耦合制備輔酶Q₁₀的方法。

本發明采用的技術方案是：