[發明專利]一種可用作免疫抑制劑的帶有－Val－Sta－Leu－殘基片段的環肽及其合成工藝

有效

• 申請號: 200810061031.2
• 申請日: 2008-05-01
• 公開（公告）號: CN101289498A
• 公開（公告）日: 2008-10-22
• 發明（設計）人: 李湘;徐琪
• 申請（專利權）人: 杭州中肽生化有限公司
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/02;C07K1/20;A61P37/06
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司
• 代理人: 俞潤體

1.一種可用作免疫抑制劑的帶有-Val-Sta-Leu-殘基片段的環肽，環Ile-Ile-Pro-Pro-Tyr-Val-Sta-Leu，其結構式為：

其中Sta是Statine的簡稱。

2.根據權利要求1所述的帶有-Val-Sta-Leu-殘基片段的環肽，其特征在于為白色粉末，難溶于水，易溶于有機溶劑乙醇、DMSO中。

3.一種如權利要求1或2所述的可用作免疫抑制劑的帶有-Val-Sta-Leu-殘基片段的環肽的合成工藝，其特征在于有如下步驟：

1)脫除氨基保護基：將Fmoc-Val-Wang?Resin?8.0g，合成規模為2.0mmol，用DMF浸泡30min，使之充分溶脹，然后抽干；加入含20％哌啶的DMF溶液20mL，通氮氣反應30min，再抽干；然后用DMF洗滌5次，以除去殘留的脫保護試劑，茚三酮檢測，若樹脂呈深藍色，則表明Fmoc保護基已經脫除，得到H-Val⁷-Wang?Resin；

2)接肽反應：在反應器中加入溶解有6.6g?Fmoc-Val-OH的DMF溶液，

通氮氣攪拌幾分鐘，然后加入HBTU，最后加入NMM，反應30min；得到Fmoc-Val-Pro-Wang?Resin；加入DMF的量以完全浸沒樹脂為準，抽干，用DMF洗滌5次；然后用甲醇洗滌樹脂，以除去氨基酸溶液和DMF；以便進行茚三酮檢測，檢測結果若樹脂呈現無色，則說明反應較為完全；然后再次用含20％哌啶的DMF溶液脫保護，得到H-Val-Pro-Merrifield?Resin；按肽鏈的氨基酸序列依次繼續用Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Sta-OH重復以上接肽反應，直至最終合成出所需肽鏈；完整的合成順序為：Val，Tyr，Pro，Pro，Ile，Ile，Leu，Statine；

3)肽鏈的切割：將合成肽鏈用HF液切割，反應時間為3.0h，然后減壓過濾，收集濾液，用冷乙醚沉淀溶解在切割液中的多肽，8000rpm離心10min，于真空干燥器中干燥12h，得線性肽鏈的粗品，純度56％；粗品經硅膠柱純化的粗品純度92％，得率85％；

4)肽鏈的環化：將線性純化多肽0.5g用200mL?DMF溶解，加入一定量的EDC、HOBt和DIEA，反應過程用離子阱質譜儀全程跟蹤直至所有的線性肽都轉化成環狀多肽為止，總時間約30-40分鐘；蒸干DMF，得環肽粗品，粗品純度75％。

4.根據權利要求3所述的環肽合成工藝，其特征在于所述的肽鏈的環化步驟后有環肽粗品的純化步驟：將環化粗品肽溶于適量DMSO中，用高效液相色譜儀進行分離純化，色譜柱為C18反相柱，洗脫液：A液為0.1％TFA的水溶液，B液為含0.1％TFA的乙腈水溶液，檢測波長為220nm；純化好的液體進行凍干得最終環化多肽244mg，純度98.8％，得率60.8％。