[發明專利]食物過敏原特異性IgG4抗體ELISA檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 200810060570.4
• 申請日: 2008-03-28
• 公開（公告）號: CN101256186A
• 公開（公告）日: 2008-09-03
• 發明（設計）人: 吳善東
• 申請（專利權）人: 杭州浙大生科生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及了一種半定量檢測人血清中食物過敏原特異性IgG4抗體的酶聯免疫吸附分析(ELISA)檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

幾十年來，醫學界一直在密切關注和研究食物過敏反應和誘發過敏性疾病的天然食物、轉基因改良食物、食物添加劑及防腐劑。食物過敏反應分IgE免疫介導的過敏反應和非IgE免疫介導的過敏反應。在IgE介導的過敏反應中，食物中的過敏原成分刺激產生的食物過敏原特異性IgE抗體與在肥大細胞，嗜堿性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞和血小板等細胞膜表面的F_CεR1和F_CεR2受體結合，釋放組胺、腫瘤壞死因子(TNFα)等炎癥介質，引起過敏反應的病癥。在非IgE免疫介導的食物過敏反應中，食物過敏原誘導人肥大細胞和嗜堿性粒細胞膜上的IgG抗體高親和受體FcγR1活化，與IgG結合后集聚、脫顆粒、釋放組胺和花生四烯酸代謝物等炎癥介質，觸發惡心、腹瀉、腹痛等胃腸道癥狀和其他典型的過敏性鼻炎，過敏性皮炎及風疹等過敏性疾病(Tkaczy?c?et?al，2002，Mol?Immunol，38：1289-1296)。IgG抗體是多態形的，有IgG1、IgG2、IgG3及IgG4等4種亞類。Halpern?SR?et?al建議IgG致敏抗體實際上是IgG4(Halpern?SR?et?al，2001，Hematology(Oxford)，40：1175-1179)。Okayama?Y?et?al證實，人肥大細胞上的FcγR1受體活化釋放的炎性介質與IgE抗體高親和受體F_CεR1受體激發釋放的炎性介質定性上是無法區分的(Okayama?Y?et?al，2001，J?Immunal，166；4705-4712)。Ruiter?B?et?al的研究發現，與非過敏體質的個體相比，無牛奶過敏史的過敏體質兒童和成人的牛奶致敏蛋白特異性IgG4水平較高；對牛奶耐受的過敏體質和非過敏體質個體都發現有卵類粘蛋白特異性IgG4抗體，但沒有發現有塵螨的特異性IgG4抗體。由此得出對牛奶耐受的過敏體質兒童和無牛奶過敏反應成人與提高特異性IgG4水平，同時降低特異性IgE抗體水平相一致。牛奶耐受過敏體質個體特異性IgG4水平上調可能與過敏原的類型及其暴露的劑量相關(Ruiter?B?et?al，2007，ClinEXP?Allergy，37：1103-1110)。Greenberger?PA認為：過敏性疾病的免疫治療減輕過敏性疾病的癥狀，特別是對過敏性鼻炎和過敏性哮喘的免疫治療，反映了細胞因子和免疫球蛋白受過敏原刺激而改變，抗抗原的IgG抗體水平升高2-10倍，IgG4升高10-100倍，而抗抗原的IgE抗體水平則明顯下降，鼻腔或支氣管的肥大細胞和嗜堿性粒細胞的數目減少，下調淋巴細胞和IL-4，而干擾素γ(IFNγ)的增高不足(Greenberger?PA，2002，Immunotherapy?update：Mechanismofaction，Allergy?Asthma?Proc，23：373-376)。這些研究清楚的說明了IgG4在免疫治療中的封閉抗體作用是抑制過敏原誘導從堿性粒細胞和肥大細胞釋放炎性介質，同時將過敏原展示于T細胞、抑制T細胞活性。IgG4作為致敏抗體或封閉抗體的雙重作用是IgG4抗體有二種亞型：IgG4a和IgG4b；IgG4a與IgG1、IgG3的結構上有一定程度相似，而IgG4b與IgG2結構上相似(Van?Der?ZeeJS，Aalberse?RC，1988，N?Engl?Reg?Allergy?Proc，9：31-33)。

IgG(主要是IgG4)介導的免疫食物過敏反應發病遲緩，通常在攝入食物24-120小時之后，臨床表現為多個系統的慢性癥狀，患者很難做出自我診斷，且檢測手段不普及，造成臨床診斷的困難。免疫治療過敏性疾病的過程中，患者血清中特異性IgE濃度逐漸下降至某一范圍，而特異性IgG4卻逐漸上升至某一水平，成為免疫治療的療效的評估指標，酶免疫分析體外檢測過敏患者血清中食物過敏原特異性IgG4抗體濃度的優越性就突出了。

酶免疫分析中有多種檢測結合酶的方法，如熒光法、化學發光法和TMB比色法等。其中TMB比色法的酶聯免疫吸附分析(ELISA)方法只需使用普通普及型的酶標議，經濟快速、簡單安全、適合我國多級醫院使用。