[發明專利]一種聚陽離子轉基因載體及其合成方法

無效

• 申請號: 200810059345.9
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101338318A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 林李家宓;湯谷平;姚宏;孔祥復
• 申請（專利權）人: 林李家宓;湯谷平;姚宏
• 主分類號: C12N15/64
• 分類號: C12N15/64;C08B37/16
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 盛輝地

1、一種聚陽離子轉基因載體，其特征是環糊精-聚乙烯亞胺-葉酸三元組裝式聚陽離子載體，結構式如下：

式中：n為環糊精-聚乙烯亞胺單元結構的個數，m₁為聚乙烯亞胺中伯氨基單元的數量，m₂為聚乙烯亞胺中仲氨基單元的數量，其中n的值與環糊精-聚乙烯亞胺-葉酸的分子量有關，m₁，m₂的值與聚乙烯亞胺的分子量有關。

2、權利要求1所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是以環糊精為交聯骨架，連接小分子量的聚乙烯亞胺，將葉酸偶合于環糊精-聚乙烯亞胺載體材料上，構建成納米聚陽離子載體結構，反應式如下：

步驟1

步驟2

步驟3

反應式中，(1)是環糊精結構式，(2)是活化的環糊精結構式，(3)是聚乙烯亞胺結構式，(4)是環糊精連接了聚乙烯亞胺的結構式，(5)是葉酸的結構式，(6)是最終產物環糊精-聚乙烯亞胺-葉酸的結構式；結構式中：n為環糊精-聚乙烯亞胺單元結構的個數，m₁為聚乙烯亞胺中伯氨基單元的數量，m₂為聚乙烯亞胺中仲氨基單元的數量，其中n的值與環糊精-聚乙烯亞胺-葉酸的分子量有關，m₁，m₂的值與聚乙烯亞胺的分子量有關。

3、根據權利要2所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是所述反應步驟如下：

●環糊精的活化：將環糊精溶解于重量體積比20-50倍量的二甲基亞砜中，加人活化羥基的連接劑，用量為環糊精重量比5-20倍量，將連接劑溶解于重量體積比1-5倍量的二甲基亞砜中，在氮氣保護下于暗處將連接劑加入環糊精溶液中，加入催化劑三乙胺，攪拌反應120-240分鐘，反應完畢后，在冷凍的乙醚中析出白色沉淀物，過濾，得到經過活化環糊精，溶于二甲基亞砜中保存；

●聚乙烯亞胺的偶聯：取經過活化環糊精，加人小分子量聚乙烯亞胺，用量為經過活化環糊精重量比3-15倍量，將聚乙烯亞胺溶解于重量體積比2-5倍量的二甲基亞砜中，在氮氣保護下于暗處，將聚乙烯亞胺溶液滴加在環糊精溶液中，在90-120分鐘加完，加入催化劑三乙胺，滴加完畢后在室溫下繼續反應90-120分鐘，反應完畢后的溶液在透析袋中48小時，然后冰凍干燥48小時，得到白色粉末狀物質，即環糊精-聚乙烯亞胺載體材料；

●葉酸的接入：取環糊精-聚乙烯亞胺載體材料，溶解于重量體積比10-25倍量的二甲基亞砜中，將葉酸溶解于重量體積比20-50倍量的二甲基亞砜中，在氮氣保護下于暗處逐滴加入上述環糊精-聚乙烯亞胺載體材料的溶液中，加入環糊精-聚乙烯亞胺與葉酸的重量比為1-5倍量，在90-120分鐘加完，加入催化劑三乙胺，滴加完畢后在室溫下繼續反應10小時，反應完畢后的溶液在透析袋中48小時，然后冰凍干燥48小時，得到淡黃色粉末狀物質，即環糊精-聚乙烯亞胺-葉酸三元組裝式的納米聚陽離子非病毒性轉基因載體。

4、根據權利要求1或2或3所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是：環糊精包括a、β、γ環糊精中的任何一種。

5、根據權利要求3所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是：活化羥基的連接劑為：N，N’-羰基二咪唑、苯并三唑碳酸酯、氯甲酸酯、羰基咪唑、N，N’-二琥珀酰亞胺基硫酸酯、N-羥基琥珀酰亞胺氯甲酸酯中任一種。

6、根據權利要求3所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是：小分子量聚乙烯亞胺分子量為：600、1200、2000的聚乙烯亞胺中任一種。

7、根據權利要求3所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是：透析袋的分子量在3500-15000范圍內。

8、根據權利要求3所述的聚陽離子轉基因載體的合成方法，其特征是：催化劑三乙胺的用量是：環糊精、聚乙烯亞胺或葉酸與葉酸三乙胺的重量體積比為10-50倍量。