[發(fā)明專利]一種治療肝衰竭的藥物及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810057541.2
• 申請日: 2008-02-02
• 公開（公告）號: CN101496815A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 裴雪濤;滕越;王韞芳;南雪;白慈賢;師偉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所
• 主分類號: A61K35/407
• 分類號: A61K35/407;A61K38/19;A61K9/50;C12N15/12;C12N15/85;A61P1/16
• 代理公司: 北京尚誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 邸萬杰

1.一種治療肝衰竭的藥物，它的有效成分為采用微囊技術(shù)混合包裹的肝細(xì)胞和 表達重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞，所述肝細(xì)胞和表達重組人堿 性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞的混合比例為10～1∶1；所述肝細(xì)胞來源于 大鼠、小鼠或豬，或經(jīng)大鼠、小鼠、豬或人的干細(xì)胞誘導(dǎo)而來的肝細(xì)胞或肝樣細(xì)胞； 所述表達重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞為轉(zhuǎn)染重組人堿性成纖 維細(xì)胞生長因子基因的重組人胎肝基質(zhì)細(xì)胞。

2.一種制備權(quán)利要求1所述的治療肝衰竭的藥物的方法，包括以下步驟：

1)將肝細(xì)胞制成懸液與表達重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞 混合形成細(xì)胞混合物；

2)將步驟1)獲得的細(xì)胞混合物微囊化，得到治療肝衰竭的藥物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中用Seglen膠原酶 /EGTA兩步灌注法制備肝細(xì)胞懸液：將肝細(xì)胞重懸于含8-12％小牛血清的1640培養(yǎng) 液中，然后測定細(xì)胞存活率，若存活率大于90％，得到肝細(xì)胞懸液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中將肝細(xì)胞與表達重 組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞混合物微囊化的方法為：對步驟1) 獲得的細(xì)胞懸液進行離心，棄上清液，將細(xì)胞沉淀重懸于質(zhì)量/體積百分濃度為 1.0-2.0％的藻酸鈉溶液中，然后將細(xì)胞懸液置于氣流式微囊形成儀中，調(diào)整氣流量 為2-6L/min，用3-6號針尖打出，滴入質(zhì)量/體積百分濃度為1.0-2.0％的氯化鈣溶 液中，靜置20-30min后，洗滌；然后，將混合細(xì)胞置入質(zhì)量/體積百分濃度為0.05-0.15 ％的多聚賴氨酸溶液中靜置4-8min，洗滌；再將混合細(xì)胞置入質(zhì)量/體積百分濃度為 0.1-0.2％的藻酸鈉溶液中，靜置2-6min，洗滌；最后，將混合細(xì)胞加入質(zhì)量/體積 百分濃度為1.0-2.0％的檸檬酸三鈉溶液中，靜置3-7min，洗滌，得到微囊化的肝細(xì) 胞與表達重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的人胎肝基質(zhì)細(xì)胞混合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述洗滌液均為生理鹽水。