[發(fā)明專利]一種以石榴皮為原料酶法制備鞣花酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810056007.X
• 申請日: 2008-01-11
• 公開（公告）號: CN101481714A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁其朋;程艷;張倩
• 申請（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18
• 代理公司: 北京思海天達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 霍京華

1.一種以石榴皮為原料酶法制備鞣花酸的方法，通過單寧酶與鞣花單寧的酶促反應(yīng)，得到鞣花酸粗產(chǎn)品，經(jīng)溶劑結(jié)晶純化獲得純鞣花酸，具體步驟和條件為：

A?鞣花單寧的提取

將烘干的石榴皮粉碎后，加入到體積濃度為20～60％的乙醇水溶液中，置于功率為80-100W的超聲波作用下超聲處理2-3次，每次25-40分鐘，得到鞣花單寧的乙醇水溶液，濃縮回收乙醇后，得到鞣花單寧濃縮液；

B?單寧酶的發(fā)酵培養(yǎng)

將黑曲霉Aspergillus?niger?3.316接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，25-30℃下培養(yǎng)20-24小時，移至產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在25-30℃下培養(yǎng)4-6天，離心并用去離子水洗滌，獲得含單寧酶的菌體，加入pH＝5.0的檸檬酸緩沖液得到菌懸液，菌懸液于冰浴中在功率400-600W的超聲波作用下進行超聲破碎，破碎時間為20-30分鐘，得到單寧酶的粗酶液；

C?酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)

將步驟A得到的鞣花單寧濃縮液，加水稀釋至原來體積的1-2倍，用NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5，將步驟B得到的粗酶液加入其中，粗酶液與稀釋后的鞣花單寧溶液的體積比為1：2-3，在25-30℃下酶促轉(zhuǎn)化反應(yīng)40-48小時，反應(yīng)液經(jīng)過濾，得到鞣花酸粗產(chǎn)品；

D?溶劑結(jié)晶純化

將步驟C得到的鞣花酸粗產(chǎn)品加入甲醇，在70～80℃溫度下萃取3～9小時后，將萃取液濃縮至飽和，降至室溫結(jié)晶，反應(yīng)液過濾后，濾餅經(jīng)水洗、干燥，得到淡黃色鞣花酸產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是：發(fā)酵種子培養(yǎng)基的組成和含量是：NaNO₃?1.5-2.5g/l，K₂HPO₄?0.5-1.5g/l，MgSO₄·7H₂O?0.4-0.8g/l，KCl?0.4-0.8g/l，F(xiàn)eSO₄?0.008-0.015g/l，蔗糖25-35g/l，其余為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是：產(chǎn)酶培養(yǎng)基的組成和含量為：鞣花單寧10-16g/l，KH₂PO₄?0.5-1.5g/l，K₂HPO₄?0.5-1.5g/l，NaNO₃?1.5-2.5g/l，KCl?0.4-0.8g/l，MgSO₄·7H₂O?0.4-0.8g/l，F(xiàn)eSO₄?0.008-0.015g/l，乳糖5-15g/l，吐溫-80?1.5-3ml/l，用NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值為4-4.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是：步驟D的溶劑結(jié)晶純化中，萃取分二至三次完成，每次1～3小時。