[發明專利]一種抗雞新城疫病毒轉移因子的制備方法

無效

• 申請號: 200810053541.5
• 申請日: 2008-06-17
• 公開（公告）號: CN101298467A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發明（設計）人: 田杏芳;王連民
• 申請（專利權）人: 天津生機集團股份有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/34;A61P31/14
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司
• 代理人: 閆俊芬

1.一種抗雞新城疫病毒轉移因子的制備方法，其特征在于，按照以下步驟進行：

(1)制備病毒抗原：將雞新城疫病毒接種于10天齡雞胚尿囊液，33℃下48-72小時，取雞胚尿囊液，裝厚壁小瓶子內，超聲打碎，5000rpm離心20分鐘，棄去沉渣留上清；

(2)提取病毒抗原：取離心上清，然后不連續梯度密度離心純化提取病毒抗原；將病毒抗原離心后，取上清液裝入以15％、30％、45％及60％的蔗糖制備的不連續梯度密度離心管，超速離心，110,000-165,000轉/分3小時，根據雞新城疫病毒所在離心管位置，吸出雞新城疫病毒備用；

(3)用上述提取的病毒抗原免疫豬：挑選健康的豬，取制備的病毒抗原，用上述提取病毒抗原皮下多點注射免疫豬，共免疫4次，前兩次分別以完全佛氏佐劑及不完全佛氏佐劑混合抗原，以高速組織勻漿機打勻，在動物皮內或皮下多點注射免疫，第3次和第4次后在動物的肌肉或靜脈注射，每次免疫間隔一周，最后一次免疫7-10天后取動物靜脈血，以免疫熒光方法或ELISA方法檢測上述病毒的特異性抗體效價，出現病毒特異性免疫效價后，宰殺動物，取脾臟和胸腺于冰上，轉移至-20℃保存，備用；

(4)從免疫豬中提取抗雞新城疫病毒轉移因子：

①原材料的制備及預處理：將病毒免疫接種豬的脾及淋巴結組織，用冷三蒸水洗凈豬脾，去其表面的筋膜、脂肪等組織，再滅菌生理鹽水反復沖洗；

②破碎：將洗干凈的豬脾臟剪碎，加入2倍體積的冷生理鹽水，在冰凍的條件下用高速組織搗碎機以1000r/min搗碎3次，每次3min，制得勻漿液；

③凍融：將勻漿液置于-80℃快速冷凍，水浴30℃中融化，交替凍融4-6次，每次融化后均以組織勻漿機高速勻漿粉碎；

④提取：加入3倍體積的冷生理鹽水，置于冰凍離心機于5℃以4000r/min離心30分鐘，取上層血紅色液體，再用G2砂心漏斗過濾，取濾液；

⑤超濾：將上述濾液用截流值為6000道爾頓的中空纖維超濾膜加壓超濾，濾液為分子量小于6000道爾頓的轉移因子；

⑥除菌：將超濾得到的濾液用孔徑為0.22um的濾膜加壓過濾除菌；

⑦分裝：4℃密封保存，即得所述的抗雞新城疫病毒轉移因子提取液。