[發明專利]抗日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原的雞卵黃抗體及其制備和應用

無效

• 申請號: 200810048728.6
• 申請日: 2008-08-07
• 公開（公告）號: CN101643507A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 劉文琪
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/02;C07K1/14;G01N33/53
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司
• 代理人: 樊 戎

技術領域

本發明涉及寄生蟲的診斷技術，特別涉及日本血吸蟲

背景技術

血吸蟲是一種寄生在靜脈血管中的蠕蟲，可感染人和牛等家畜在內的多種哺乳動物引起血吸蟲病。血吸蟲病病人若得不到及時的診斷和治療，可引起以肝硬化和腹水為主的晚期血吸蟲病，病人完全喪失勞動能力和生活自理能力，并最終因肝昏迷或不可控制的上消化道出血而死亡。目前，血吸蟲病仍是一種嚴重危害人類健康和經濟發展的寄生蟲病，全世界有74個國家和地區流行此病，每年感染人數仍達2億之多，在我國流行的為日本血吸蟲病。血吸蟲病在我國長江流域及以南的湖南、湖北、江西、安徽、江蘇、云南、四川、浙江、廣東、廣西、上海、福建等13個省、市、自治區的370個縣市流行，累計感染者達1160萬人，釘螺面積為143億m²，受威脅人口在1億以上。因此，血吸蟲病防治工作所面臨的形勢仍然十分嚴峻。

人及牛、豬、鼠等多種哺乳動物是血吸蟲的終宿主，當人或牛等接觸含有血吸蟲尾蚴的疫水時，尾蚴鉆入宿主皮膚并脫掉尾部轉變成童蟲，在宿主皮下組織作短暫停留后，進入血管或淋巴管，隨血流經右心到肺，再由左心進入大循環，到達腸系膜動脈的童蟲可穿過毛細血管進入肝門靜脈。童蟲在肝門靜脈發育到性器官初步分化后，即雌、雄合抱，再移行到腸系膜靜脈及直腸靜脈寄居、交配、產卵。從尾蚴鉆入皮膚到蟲體發育成熟并產卵，日本血吸蟲約需24天。成蟲寄生于門脈-腸系膜靜脈系統，雌蟲產卵于腸粘膜下層靜脈末梢內。一部分蟲卵隨靜脈血流沉積在肝或結腸腸壁組織內，另一部分蟲卵可隨破潰的組織落入腸腔，并隨宿主糞便排出體外。排出體外的蟲卵必需入水，在合適的溫度、滲透壓和光照等條件下孵出毛蚴，當毛蚴遇到其中間宿主釘螺時即鉆入釘螺體內，經過母胞蚴、子胞蚴的無性繁殖階段發育成尾蚴。尾蚴自螺體逸出后即可感染新的宿主，開始新一代的繁殖。

早期、正確的診斷是控制血吸蟲病流行的重要環節。我國經過半個多世紀的血防工作，目前絕大部分疫區的血吸蟲病感染率和患者的感染度都有明顯下降，處于輕中度感染(5-10％)。在血吸蟲病的診斷中，糞檢發現蟲卵是確診血吸蟲感染的依據，但由于排卵量受感染度和感染階段等諸多因素的影響，在中度或低度血吸蟲病流行區糞檢的敏感性并不能令人滿意，漏檢率高，特別是在我國，單純依靠糞檢已不能滿足血吸蟲病診斷的需要，因此免疫學檢查已成為血吸蟲病診斷的重要手段。傳統的免疫學診斷主要是檢測患者血清中抗血吸蟲抗原的特異性抗體。常用的抗體檢測方法有皮內試驗(intradermal?test，IDT)、環卵沉淀試驗(circumoval?precipitin?test，COPT)、間接紅細胞凝集試驗(indirect?haemagglutination?test.IHA)、酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA)、間接熒光抗體試驗(indirect?fluorescent?antibody?method，IFA)等。但抗體存在時間長，無法區分現癥和既往感染，對病人治療的指導意義不大。而循環抗原(circulating?antigens，CAg)是活的蟲體在人體內寄生時排泄分泌的，一般認為，在急性血吸蟲病患者血清中CAg含量高，而在慢性血吸蟲病患者血清中，由于CAg不斷與血清抗體結合形成血吸蟲循環免疫復合物，故CAg含量較少。所以，CAg檢測對于血吸蟲病的早期診斷和區分現癥感染和既往感染特別有價值，并能作為療效考核的指標，但因含量少，所以對檢測方法的靈敏性要求更高。

在國內外研究者的共同努力下，血吸蟲病的免疫學診斷取得了顯著的進步，但仍然存在一些關鍵的技術問題。

(1)現行的血吸蟲病檢測系統的療效考核價值均不理想，主要原因是現有的大量檢測試劑都是檢測抗體的，而抗體在病人治療后的1-3年甚至十幾年后仍可在血清中檢測到，無法區分現癥和既往感染，因此需為療效考核提供一種有效的以檢測抗原為主的診斷系統。

(2)循環抗原檢測方法的主要困難在于患者特別是慢性期患者體內的循環抗原含量非常少，目前的檢測體系的敏感性較低，尤其是在對大量的輕度流行區的評估上還沒有十分行之有效的方法。

(3)血吸蟲病診斷試劑種類很多，水平參差不齊，試劑質量存在批間生產的差異和不穩定的問題；診斷標準不夠客觀化，易導致人為誤差等。

當前，尋找敏感和特異的循環抗原檢測方法并推向廣大的流行區是血吸蟲病診斷試劑研究與開發的主要方向。