[發明專利]抗日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原的雞卵黃抗體及其制備和應用

無效

• 申請號: 200810048728.6
• 申請日: 2008-08-07
• 公開（公告）號: CN101643507A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 劉文琪
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/02;C07K1/14;G01N33/53
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司
• 代理人: 樊 戎

1.一種抗日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的雞卵黃抗體，其特征在于，它是用血吸蟲的特異性抗原以注射的方法免疫母雞后，從被免疫母雞的雞蛋黃中提取的特異性免疫球蛋白免疫球蛋白IgY。

2.制備抗日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的雞卵黃免疫球蛋白IgY的方法，包括以下步驟：

(1)制備日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA；

(2)用日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA免疫母雞，并收集雞蛋；

(3)從被免疫母雞的雞蛋黃中提取、純化特異性IgY。

3.根據權利要求2所述的制備日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的雞卵黃免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的制備方法是：將感染日本血吸蟲的釘螺在25℃，光照充分的情況下逸出尾蚴，將至少20只釘螺逸出的尾蚴混合，經皮膚感染清潔級新西蘭大白兔，感染量為800條尾蚴/兔，感染45天后麻醉感染的兔，生理鹽水心臟灌注，然后剖殺并取出肝臟，分離并收集肝臟蟲卯。將收集的蟲卵在冰浴中反復勻漿后，4℃沉淀48h，10000×g離心1h，吸取上清，收集分裝，即為蟲卵可溶性抗原SEA。

4.根據權利要求2所述的制備日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的雞卵黃免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的用日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA免疫母雞的方法是：將60μg/ml的SEA0.5ml與等體積的完全福氏佐劑混合，充分乳化后經翅膀下靜脈免疫。首次免疫后10d，改用抗原加不完全福氏佐劑經雞背部皮下加強免疫3次，免疫劑量為30μg?SEA/只，每次間隔10d。自首次免疫后7d起收集雞蛋，做好標記于4℃冰箱保存。

5.根據權利要求2所述的制備日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA的雞卵黃免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的從被免疫母雞的雞蛋黃中提取、純化特異性IgY的方法是：取初次免疫后60d的雞蛋，去除蛋殼，用去離子水洗去卵黃外面的蛋清。去掉卵黃衣膜，將卵黃與兩倍體積的0.01mol/L?pH?7.6的磷酸鹽緩沖液(Phosphate?Buffer?Solution，PBS)混合，并充分攪拌。加聚乙二醇6000(PEG?6000)至最終濃度為5％，并攪拌至PEG完全溶解。4420×g室溫離心20min，將上清液過濾，繼續加PEG至其濃度為20％，充分攪拌溶解后12,000×g室溫離心10min。去掉上清液，用1/6的原卵黃體積的PBS重新溶解沉淀，蒸餾水中4℃透析2h，其間換水3～4次。最后置PEG中濃縮至原體積的1/10，收集濃縮后的IgY，分裝后置-20℃保存備用。

6.一種體外檢測血吸蟲循環抗原的方法，其特征在于，以權利要求1所述的抗日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原的雞卵黃抗體接觸待測血清。

7.一種檢測血吸蟲抗原的試劑盒，包括：

(1)已用抗SEA的IgY包被的96孔酶聯板兩塊；

(2)以非血吸蟲疫區健康人血清制備的凍干標準品1瓶0.5mg；

(3)樣品稀釋液0.01mol/l?pH?7.4的磷酸鹽緩沖液1瓶15ml；

(4)檢測用抗體辣根過氧化酶標記抗SEA單克隆抗體1瓶：25ml

(5)洗滌液0.05％pH?7.4的磷酸鹽緩沖液-吐溫201瓶：500ml

(6)底物溶液四甲基聯苯胺1瓶：20ml

(7)終止液2mol/l硫酸1瓶：20ml

(8)操作說明書。