[發明專利]生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生產方法

有效

• 申請號: 200810047859.2
• 申請日: 2008-05-29
• 公開（公告）號: CN101307341A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 過群
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友保健乳品有限公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所
• 代理人: 胡清堂

技術領域

本發明涉及利用寇氏隱甲藻[Crypthecodinium?cohnii(Seligo)Javornicky]生產二十二碳六烯酸(DHA)油脂技術領域，具體地說是一種生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生產方法。?

背景技術

近年來，多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated?fatty?acids，PUFAs)對人類健康的重要作用已愈來愈受到人們的重視。其中，二十二碳六烯酸因其在人體和動物體內的重要生理功能而倍受人們的青睞。研究表明，DHA是人體某些組織中細胞膜的基本組分；對嬰幼兒視覺系統和神經系統的發育起著重要作用；還具有降低膽固醇作用，抗凝血功效以及抑制癌功效，防止老年性癡呆癥等，并且它是幼魚生長所必需的一種脂肪酸。利用寇氏隱甲藻生產二十二碳六烯酸(DHA)油脂已形成工業化生產，二十二碳六烯酸的生產工藝在不斷改進。其中現在公開報道海洋微藻生產二十二碳六烯酸(DHA)油脂中藻細胞破壁方法有兩類。一類是物理方法破壁：機械破壁如采用均質機或膠體磨等機械進行磨檫和擠壓使細胞壁破裂、干燥法等。采用機械破壁方法細胞破壁不完全，用有機溶劑萃取收得率為總油60-70％。采用干燥法耗時耗能，且加熱及通氣方法干燥后提取油脂過氧化值較高，毛油品質較差，冷凍干燥成本較高，干燥后用有機溶劑萃取精煉后得率僅為毛油30-50％。公開日為1995年4月5日、公開號為CN1101034A的專利申請公開的利用海洋微藻生產二十二碳六烯酸(DHA)油脂的方法是采用冷凍干燥或加熱及通氣方法干燥后進行提取。另一類是化學方法破壁；采用化學試劑破壞細胞壁結構，然后用有機溶劑萃取得到毛油。公開日為2007年6月27日，公開號為CN1986822A的專利申請公開的用寇氏隱甲藻發酵生產二十二碳六烯酸油脂的方法是采用加破壁劑如十二烷基硫酸鈉等，其用量為濃縮發酵液重量的0.1-0.6％。這種方法得到油脂中會有化學試劑殘留，影響油的品質。且毛油質量較差，精煉后得率僅為毛油30-50％。

發明內容

本發明的目的是研制一種將酶法破壁用于寇氏隱甲藻[Crypthecodinium?cohnii(Seligo)Javornicky]發酵生產二十二碳六烯酸油脂的方法，它大大地提高了二十二碳六烯酸(簡稱DHA)的收得率和毛油的品質。?

本發明生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生產方法，包括：以寇氏隱甲藻[Crypthecodinium?cohnii(Seligo)Javornicky]為出發菌株，在液體培養基中連續培養寇氏隱甲藻得到海藻細胞，然后通過生物酶法破壁從海藻細胞中提取二十二碳六烯酸油脂。?

本發明所用的寇氏隱甲藻菌種名稱是Crypthecodinium?cohnii(Seligo)Javornicky。可以從包括ATCC(美國典型培養物收集中心)的保藏培養機構獲得。?

生物酶分為主體酶和輔助酶；?

主體酶為堿性蛋白酶(2709)、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶，可以使用其中的一種或幾種，若為幾種，其比例可按任意比例配合使用。其用量為發酵液重量的0.12-0.5％，若為濃縮發酵液，其用量按濃縮前發酵液重量計算；?

輔助酶為胰蛋白酶、靡蛋白酶，纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶，可以使用其中的一種或多種，若為多種，其比例可按任意比例配合使用。其用量為發酵液重量的0-0.025％，若為濃縮發酵液，主體酶和輔助酶用量按濃縮前發酵液重量計算；?

在使用時，單獨用主體酶或主體酶和輔助酶并用都可達到破壁。?

本發明生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生產方法：在發酵液或過濾濃縮發酵液中加入主體酶，用量為發酵液重量的0.12-0.5％若為濃縮發酵液，其用量按濃縮前發酵液重量計算；輔助酶，用量為發酵液重量的0-0.025％，若為濃縮發酵液，主體酶和輔助酶用量按?濃縮前發酵液重量計算，升溫50-70℃，保溫攪拌3-9小時，加入95％的乙醇，乙醇用量為發酵液濃縮發酵液的30％-150％，加入有機溶劑量為發酵液或濃縮發酵液重量的1.5-4.5倍，進行萃取得到二十二碳六烯酸毛油。將二十二碳六烯酸毛油經水化、堿煉、脫色、脫臭后得到二十二碳六烯酸精煉油。?

其中所述的有機溶劑為正己烷或氯仿等。?

本發明所述的濃縮發酵液中主體酶和輔助酶的加入量，是以過濾濃縮發酵液前的發酵液量來計算的。?